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摘要目的：研究蕨麻正丁醇部位对EAHY926内皮细胞缺氧损伤的保护作用，并探讨其可能机制。<br>　　 方法：①人脐静脉内皮细胞株（EAHY926），用含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃、5％CO2、饱和湿度下培养，至EAHY926细胞生长成单层后备用。②采用MTT、台盼蓝染色及LDH（乳酸脱氢酶）活性检测，确定细胞的适宜缺氧时间，建立细胞缺氧损伤模型。③细胞随机分为正常对照组、缺氧损伤模型组、复方丹参阳性药物组、蕨麻正丁醇部位3mg/ml、1.5mg/ml、0.75mg/ml干预组（缺氧同时加入蕨麻正丁醇部位）。MTT法检测细胞代谢活力、台盼蓝染色观察细胞存活率、比色法检测细胞外LDH活性。④H.E染色观察细胞形态的变化。⑤检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、脂质过氧化代谢产物丙二醛（MDA）含量。⑥检测细胞外一氧化氮合酶（NOS）活性、一氧化氮（NO）含量及内皮素-1（ET-1）含量。⑦RT-PCR技术检测各组细胞HIF-1α、ET-1、eNOS、iNOS mRNA表达，免疫细胞化学染色及Western Blot检测各组细胞HIF-1α、eNOS蛋白表达。<br>　　 结果：<br>　　 1.在倒置显微镜下观察，正常组EAHY926细胞生长旺盛，呈上皮样贴壁生长，折光性强，细胞呈多角形或长梭形，鹅卵石样铺满底层。<br>　　 2.蕨麻正丁醇部位对EAHY926细胞缺氧损伤的保护作用：（1）MTT：与对照组比较，缺氧损伤模型组细胞代谢活力下降（P<0.01）；与缺氧损伤模型组比较，高、中、低剂量蕨麻正丁醇部位组细胞代谢活力均显著提高（P<0.01）。（2）台盼蓝染色：高、中、低剂量蕨麻正丁醇部位蓝染死细胞数量均减少，细胞存活率提高（低剂量组P<0.05，高、中剂量组P<0.01）。（3）H.E染色：缺氧损伤模型组细胞皱缩，核固缩、深染，细胞间隙增大，细胞间联系减少。蕨麻正丁醇部位干预后，上述损伤均减轻。（4）生化指标：与对照组比较，缺氧损伤模型组细胞外LDH活性显著升高（P<0.01）；与缺氧损伤模型组比较，蕨麻正丁醇部位各剂量组细胞LDH活性均显著降低（P<0.01）。<br>　　 3.蕨麻正丁醇部位对EAHY926细胞缺氧损伤保护作用的机制研究：（1）生化检测：与对照组比较，缺氧损伤模型组细胞内SOD活力下降（P<0.01）；与缺氧损伤模型组比较，蕨麻正丁醇部位组可提高内皮细胞内SOD活力（P<0.05，高、低剂量组P<0.01）。但各组MDA含量无显著差异（P>0.05）。与对照组比较，缺氧损伤模型组细胞NOS活性增加（P<0.01），NO含量减少（P<0.01），ET-1含量增加（P<0.01）；而蕨麻正丁醇部位各剂量组与缺氧损伤模型组比较细胞NO合成均增加（P<0.01），NOS活性（P<0.01）及ET-1含量均降低（P<0.01）。（2）免疫细胞化学染色：缺氧损伤模型组较对照组细胞HIF-1α蛋白表达水平增加（P<0.01），eNOS蛋白表达水平降低（P<0.01）；与缺氧损伤模型组比较，高、中剂量蕨麻正丁醇部位组、复方丹参组细胞HIF-1α蛋白表达水平均降低（P<0.01）；蕨麻正丁醇部位各剂量组、复方丹参组细胞eNOS蛋白表达水平均升高（P<0.01）。（3）RT-PCR：与对照组比较，缺氧损伤模型组HIF-1α mRNA、ET-1 mRNA、iNOS mRNA表达水平显著升高（P<0.01），eNOS mRNA表达水平显著降低（P<0.01）。与缺氧损伤模型组比较，蕨麻正丁醇部位各剂量组、复方丹参组细胞HIF-1α mRNA水平显著降低（P<0.01）；高、中剂量蕨麻正丁醇部位组、复方丹参组ET-1 mRNA表达水平降低（P<0.01）：高、中剂量蕨麻正丁醇部位组、复方丹参组eNOS mRNA表达水平增加（P<0.01）；高剂量蕨麻正丁醇部位组iNOSmRNA表达水平降低（P<0.01）。（4）Western Blot：缺氧损伤模型组较对照组细胞HIF-1α表达升高（P<0.01）、eNOS表达降低（P<0.01）。与缺氧模型组比较，蕨麻正丁醇部位各剂量组及复方丹参组细胞HIF-1α表达降低（高剂量组P<0.05，中、低剂量组及复方丹参组P<0.01）；高、中剂量蕨麻正丁醇部位组及复方丹参组细胞eNOS表达均升高（P<0.01）。<br>　　 结论：蕨麻正丁醇部位能够减轻缺氧对EAHY926细胞的损伤，减少LDH释放，增强细胞代谢活力，提高细胞存活率，对：EAHY926细胞缺氧损伤具有保护作用。这种保护作用的机制可能为：在缺氧时提高细胞清除氧自由基的能力；增加eNOS mRNA表达，促进NO产生；并经HIF-1α途径降低ET-1 mRNA和iNOS mRNA水平，抑制细胞ET-1的大量释放；从而维持NO/ET-1之间的平衡，改善内皮功能。