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摘要肝脏是体内功能最多、最复杂的器官，是生理和病理状态下，能量代谢，毒素的生物转化以及血浆蛋白合成的中心器官。急性肝衰竭，晚期肝病或先天性肝病的致死率极高，原位肝脏移植是唯一的有效方法，然而这种方法的广泛应用受到供体肝脏短缺的限制，为此研究者们提出体外肝脏灌注、生物型人工肝、肝细胞移植等技术，以期为肝功能衰竭患者度过肝脏供体等待期或为肝脏自行修复提供代谢支持。但由于肝细胞体外培养增生困难，而且难以维持功能，因此，如何获得足够数量和功能良好的原代肝细胞已成为广大学者关注的焦点。<br>　　 近年来，随着对海藻酸钠、壳聚糖性能及应用研究的深入，以及固定化细胞和各种生物技术的发展，海藻酸钠、壳聚糖在体外细胞培养中的研究逐渐增加。海藻酸钙微胶珠包埋细胞培养和海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠（ACA）微囊化细胞培养比普通培养能够提供更多的贴壁表面积，最大可能地模拟了细胞生长的三维微环境，为实现细胞的大规模培养提供了依据。另外ACA微胶囊具有免疫隔离作用而成为目前细胞移植领域的研究热点。<br>　　 本文以海藻酸钠、壳聚糖为原料，研究海藻酸钙微胶珠和ACA微胶囊的制备工艺，在此基础上进行海藻酸钙微胶珠包埋小鼠肝细胞和ACA微囊化小鼠肝细胞的培养，测定其细胞存活率及肝功能生化指标，同时探讨不同的初始培养密度对培养结果的影响。<br>　　 研究了海藻酸钙微胶珠制备的工艺条件，在单因素试验的基础上，通过正交试验，以海藻酸钙微胶珠的平均强度和通透性为考察指标，确定其最优组合为A2B3C1，其影响趋势为A>B>C，即海藻酸钠溶液浓度是最主要的影响因素，CaCl2溶液浓度次之，固定化时间影响最小。在该最优组合，即海藻酸钠溶液浓度1.75％，CaCl2溶液浓度3％，固定化时间30min条件下制备的微胶珠，平均强度为398g/c㎡，通透性A/Ao值为0.85，适合肝细胞的包埋培养。<br>　　 研究了ACA微胶囊制备的工艺条件，在单因素实验的基础上，通过正交实验，以ACA微胶囊的膨胀度为考察指标，确定其最优组合为A2B2C1D2，其影响趋势为D>C>B>A，即海藻酸钠溶液浓度为最主要的影响因素，中和反应时间和成膜反应时间次之，壳聚糖溶液浓度影响最小。在该最优组合，即壳聚糖溶液浓度1.75％，成膜反应时间8min，中和反应时间4min，海藻酸钠溶液浓度0.25％条件下所制备的ACA微胶囊膨胀度Sw值为1.125，适合ACA微囊化肝细胞的包埋培养。<br>　　 在上述海藻酸钙微胶珠和ACA微胶囊制备条件下进行原代小鼠肝细胞培养，与普通培养法比较发现：ACA微囊化肝细胞肝功能较稳定，比普通培养和海藻酸钙微胶珠包埋培养的尿素和白蛋白分泌功能均强，而海藻酸钙微胶珠包埋培养法又要优于普通培养法。这充分说明ACA微胶囊和海藻酸钙微胶珠均有良好的生物相容性，能提供更多的贴壁表面积。<br>　　 同时对两种包埋培养的初始培养密度进行了研究。海藻酸钙微胶珠包埋培养过程中不同的初始培养密度试验研究表明：初始培养密度为0.5×106～1.0×106/mL时为最佳的海藻酸钙微胶珠包埋初始培养密度，且最佳的初始培养密度较普通培养要高出5倍。ACA微胶囊培养过程中不同的初始培养密度试验研究表明：初始培养密度为1.5×106～2.0×106/mL时为最佳的ACA微胶囊初始培养密度，且最佳的初始培养密度较普通培养要高出15倍左右，较海藻酸钙微胶珠包埋培养高出3倍左右。说明ACA微胶囊内部液态环境能够更好的模拟体内肝脏的生理环境，同时有利于外部营养物质的输入和内部代谢物质的输出。<br>　　 本试验为海藻酸钠、壳聚糖在生物材料方面的开发利用提供了依据，对肝细胞体外培养理论与实践方面的探索有一定的意义。