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摘要子宫内膜异位症(endometripsis，EMs)是指具有生长功能的子宫内膜组织(腺体和间质)在子宫腔被覆内膜以外的部位生长、浸润、扩散、转移、复发等表现，引起疼痛和不育等。EMs是生育年龄妇女的常见病，近年来发病率不断上升，且青少年及绝育后妇女发病率也逐渐上升。1860年，临床上首次发现内异症，至今，虽有众多学者研究，但发病机制仍不清楚，造成对此病治疗的困难。因此对内异症发病机制的深入研究非常有必要。目前，Sampson的经血逆流种植学说仍为内异症发病机制主导理论，但近年来研究认为，经血逆流只是发生内异症的诱因，内异症的发生与免疫异常有关，甚至有人提出，EMs是自身免疫性疾病。<br>　　 树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前已知的功能最强的抗原递呈细胞(antigenpresenting cell，APC)，参与抗原识别、加工处理和递呈，在免疫应答诱导中，具有独特地位。DC的功能具有双重性，既能选择性地诱导免疫应答，又可以在一定条件下诱导免疫耐受。研究显示，DC所处的免疫状态与其成熟状态有关。在DC分化发育中，可以分为未成熟型DC及成熟型DC。未成熟型DC能够诱导CD4+T细胞形成，自身及CD4+T细胞可大量分泌免疫抑制性细胞因子IL-10，使免疫应答向耐受方向发展;成熟型DC诱导T细胞的增殖，促使IL-6大量分泌，促进细胞介导的免疫应答，导致盆腔局部粘连、纤维化和免疫学异常。研究显示，DC广泛参与机体免疫、炎症、肿瘤免疫、移植排斥、应急反应等生理及病理过程。当DC数量发生减少，或者二者比例失衡，将引起一系列免疫相关性疾病，如：哮喘、自身结缔组织性疾病、肠炎、恶性肿瘤等，已经引起人们的高度重视。目前，国内外关于DC在EMs发病及疾病进展机制的研究甚少。从脐带血提取的单核细胞在一定条件(GM-CSF+IL-4)培养下，大部分可分化成树突状细胞，小部分化为巨噬细胞。本课题通过研究不同期别EMs腹腔液对上述过程的影响，以及此过程与腹腔液中IL-10和IL-6水平的关系，来进一步阐明内异症不同疾病程度的免疫状态，探讨内异症的免疫治疗提供理论依据。<br>　　 目的：研究不同临床期别的内异症腹腔液(ePF)对脐带血单核细胞分化为树突状细胞的影响；研究ePF中细胞因子IL-6和IL-10水平的差异，以及培养后上清液中IL-6和IL-10水平的改变，探讨其在不同临床期别内异症发生及疾病发展中的作用。<br>　　 方法：<br>　　 1.本研究选择2008年7月至2009年12月间于山西医科大学第二医院妇产科住院的30例内异症患者作为实验组(EMsⅠ-Ⅱ期组、EMsⅢ-Ⅳ期组各15例)，取同期住院的子宫肌瘤患者15例为对照组，收集所有研究对象的腹腔液，一般资料，包括患者年龄、临床分期等。<br>　　 2.采集2009年1月至2009年4月间于山西医科大学第二医院产科正常分娩的新生儿脐带血，分离单核细胞。<br>　　 3.以ePF对单核细胞在加入细胞因子(GM-CSF+IL-4)的培养进行干预，采用倒置相差显微镜动态观察不同临床期别的ePF对DC的分化的影响；采用流式细胞仪检测培养7天后DC表面表达CD1a和CD83细胞所占比例；采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELSIA)检测腹腔液中和DC培养上清中IL-6和IL-10水平的变化。<br>　　 结果：<br>　　 1.ePF对单核细胞分化为DC的影响依内异症临床期别的不同而存在差异<br>　　 1.1培养24h后，实验组和对照组细胞形态无显著差异，均为培养皿内散在的细胞聚体，体积较小，绝大多数为圆形，以贴壁细胞为主，仅有少量的半悬浮细胞。且在培养的3-5天，实验组和对照组细胞形态均无显著差异。<br>　　 1.2培养第7天末，对照组中，悬浮的簇状细胞越来越多，细胞体积较大，可见细胞表面有毛刺状或并指状突起；而ePF组中，悬浮的簇状细胞少，贴壁细胞多，细胞量少，主要为巨噬细胞形态，细胞体积较小，胞质中偶有颗粒或空泡，其中EMsⅢ-Ⅳ期组较Ⅰ-Ⅱ期组更明显。<br>　　 1.3对培养前，细胞表面所表达的CD1a和CD83分别进行测定的结果显示：新鲜分离的单核细胞中CD1a细胞比例低；培养后第3天和第7天各组CD1a细胞比例升高；组间比较，EMsⅠ-Ⅱ期组表达CD1 a的细胞比例低于cPF组和EMsⅢ-Ⅳ期组，差异有显著性(P＜0.05)，EMsⅢ-Ⅳ期组与cPF组无显著性差异(P＞0.05)。培养后第3天和第7天CD83细胞比例组内比较有升高，差异有显著性(P＜0.05)；而组间比较，EMsⅢ-Ⅳ期组高于EMsⅠ-Ⅱ期组和对照组，差异有显著性(P＜0.05)；EMsⅠ-Ⅱ期组低于对照组，但差异无显著性(P＞0.05)。<br>　　 2.ePF中IL-10的水平与内异症临床分期的关系及在培养后上清液中水平的变化<br>　　 2.1培养前腹腔液中IL-10水平Ⅰ-Ⅱ期组较cPF组高，但二者比较差异无显著性(P＞0.05)；Ⅲ-Ⅳ期组较cPF组低，二者比较差异无显著性(P＞0.05)，Ⅰ-Ⅱ期组高于Ⅲ-Ⅳ期组，二者差异无显著性(P＞0.05)。<br>　　 2.2培养7天后，上清液中IL-10水平，Ⅰ-Ⅱ期组较培养前升高，差异有显著性(P＜0.05)；Ⅲ-Ⅳ期组较培养前变化不明显(P＞0.05)；cPF组较培养前稍升高，差异无显著性(P＞0.05)。组间比较，Ⅰ-Ⅱ期组高于Ⅲ-Ⅳ期组和cPF组，差异有显著性(P＜0.05)；Ⅲ-Ⅳ期组较cPF组低，但差异无显著性(P＞0.05)。<br>　　 3.ePF中IL-6的水平与内异症临床分期的关系及在培养后上清液中水平的变化<br>　　 3.1培养前腹腔液中IL-6水平Ⅰ-Ⅱ期组和Ⅲ-Ⅳ期组均高于cPF组，差异有显著性(P＜0.05)。<br>　　 3.2培养7天后，各组IL-6水平均较培养前升高，Ⅰ-Ⅱ期组升高较培养前比较无差异(P＞0.05)；Ⅲ-Ⅳ期较培养前升高差异有显著性(P＜0.05)，cPF组较培养前升高差异无显著性(P＞0.05)。培养后，各ePF组IL-6水平均较cPF组高，差异有显著性(P＜0.05)；ePF组中Ⅲ-Ⅳ期较Ⅰ-Ⅱ期组高，有显著差异(P＜0.05)。<br>　　 结论：<br>　　 1.EMs各组腹腔液使单核细胞分化为DC的数目较对照组低；其中Ⅰ-Ⅱ期EMs腹腔液培养的DC多为非成熟型，而Ⅲ-Ⅳ期EMs腹腔液培养的DC多为成熟型。<br>　　 2.在腹腔液干扰DC的分化中，Ⅰ-Ⅱ期EMs患者腹腔液中IL-10浓度的升高，提示早期内异症局部免疫环境处于抑制状态，从而有利于异位的子宫内膜逃脱免疫监控，在腹腔继续存活，并生长、种植到盆腔其他脏器。<br>　　 3.Ⅲ-Ⅳ期EMs患者腹腔液中含有较高水平的IL-6，且在培养后IL-6水平增高，提示中、重度内异症局部免疫环境处于激活状态，从而增加了周围组织的粘连。