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摘要目的：克隆小鼠αA-Crystallin基因特异性启动子活性片段，并构建以小鼠αA-Crystallin基因启动子（αACP）驱动的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）双顺反子特异表达载体，为白内障基因治疗药物的开发提供前期实验基础。<br>　　 方法：利用PCR技术，从小鼠总DNA上扩增αA-Crystallin基因特异性启动子活性片段，应用TA克隆技术构建pMD19-T-αACP，克隆小鼠αA-Crystallin基因特异性启动子活性片段，并通过测序证实其克隆成功。利用基因重组技术将小鼠αA-Crystallin基因特异性启动子活性片段（αACP）替换真核表达载体pIRES2-EGFP上的CMV启动子，命名融合质粒为pαACP-IRES2-EGFP，将其注射入大鼠幼鼠的晶状体球后，在荧光显微镜下观察晶状体冰冻切片，通过增强型绿色荧光蛋白的表达效果来验证启动子的活性。<br>　　 结果：通过pMD19-T-αACP融合质粒的测序证实小鼠αA-Crystallin基因特异性启动子活性片段（αACP）克隆成功，并构建于pIRES2-EGFP质粒中形成融合质粒pαACP-IRES2-EGFP，对其融合质粒上αACP基因片段行PCR扩增、酶切图谱分析获得412bp的αACP目的条带，经测序鉴定与基因库中（NC00083）小鼠αACP序列相比有99％的同源性，表明成功构建了包含小鼠αA-Crystallin启动子活性片段（αACP）的特异表达载体pαACP-IRES2-EGFP，将其注射入大鼠幼鼠的晶状体球后，经冰冻切片在荧光显微镜下可看到绿色荧光，证实了αACP的启动子活性。<br>　　 结论：成功构建了αA-Crystallin基因特异启动子（αACP）驱动的增强型绿色荧光蛋白特异表达载体并实现其在大鼠晶状体上皮细胞中的特异性表达。