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摘要糖尿病的显著特征是高血糖，糖尿病病理研究关注的重点是慢性持续高血糖对人体的伤害。近年来临床医学观察发现，糖尿病的主要危害在于其慢性并发症的发生，而糖尿病并发症的发生发展不仅与高血糖相关，而且与糖尿病患者血糖波动密切相关，血糖波动较大的患者发生糖尿病慢性并发症的风险更大。因此，要治疗糖尿病，减少糖尿病慢性并发症的危害，更需要关注血糖波动，并研究它加速机体损伤的机理，寻求控制血糖水平的方法和途径。本实验的研究目的是建立灵敏、成熟、可靠的血糖波动小鼠模型，来进一步研究血糖波动后对糖尿病小鼠肾脏和皮肤胶原蛋白合成的影响，并对其机制进行初步探讨，为临床实践提供一定的实验依据。本文从以下三个方面开展研究。<br>　　 一、血糖波动小鼠模型的建立<br>　　 建立一种灵敏、成熟、可靠的血糖波动小鼠模型的方法，为在体研究血糖波动对小鼠脏器的影响提供实验材料和研究手段。实验分三组：正常对照组(N)、糖尿病模型组(D)和糖尿病波动组(DF)。DF组于每天定时腹腔注射葡萄糖溶液；同时，N组和D组腹腔注射生理盐水作为对照。小鼠饲养时间为8周。分别于建模前、建模后1周、4周和8周监测各组小鼠的空腹血糖值。建模8周后，对各组小鼠平均每同的食量，水量进行监测。用血糖仪在一天内进行连续的血糖监测，绘制“时间一血糖浓度”曲线。<br>　　 结果：表明，尾静脉注射四氧嘧啶一周后，小鼠的空腹血糖值升高；在第四周和第八周时，DF组空腹血糖值继续升高，与D组出现差异。八周后，D组和DF组小鼠的食量和水量相对于N组有了显著的上升；DF组小鼠的食量相比于D组有所降低；D组与DF组小鼠消耗水量无差异。一天内的血糖值，N组小鼠为正常水平；D组小鼠血糖基础值较高，波动幅度不大；DF组小鼠血糖基础值最高，波动幅度较大。可见定时腹腔注射高浓度葡萄糖溶液的方法可以提高糖尿病小鼠的空腹血糖值，并能引起糖尿病小鼠出现大幅度的血糖波动，这种方法能够建立灵敏、准确、可靠的血糖波动小鼠模型。<br>　　 二、血糖波动对糖尿病小鼠肾脏胶原蛋白合成的影响及机理研究<br>　　 通过建立血糖波动小鼠模型，检测小鼠肾脏中I型胶原及相关蛋白的表达情况，并对影响小鼠肾脏中I型胶原蛋白合成的细胞信号通路进行探讨。建立血糖波动小鼠模型八周后，将小鼠肾脏取出，制作小鼠肾脏组织石蜡切片，并对肾脏石蜡切片进行免疫组化染色，观察肾脏组织的形态和I型胶原的含量与分布情况；提取小鼠肾脏总mRNA和总蛋白，用RT-PCR和Westem-bloting检测肾脏中I型胶原蛋白和相关蛋白的表达情况，并检测相关通路中细胞信号因子的磷酸化程度。<br>　　 结果：表明，D组和DF组的小鼠肾脏皮质区域细胞间空隙增多，DF组小鼠肾脏皮质区域的I型胶原染色程度较高：D组肾小球区域I型胶原染色程度要高于N组，而DF组染色程度要高于D组。mRNA表达量和蛋白含量：I型胶原，TIMP1和Tgf-β1的mRNA，DF组高于D组，D组高于N组；MMP1，DF组低于D组，D组低于N组：细胞信号因子磷酸化程度：ERK，Smad2和Smad3，DF组高于D组，D组高于N组；可见血糖波动通过活化Tgf-β信号通路中Smads依赖的信号通路，增加糖尿病小鼠肾脏中胶原蛋白的合成，造成肾脏纤维化的进一步加剧。<br>　　 三、血糖波动对糖尿病小鼠皮肤胶原蛋白合成的影响<br>　　 通过建立血糖波动小鼠模型，检测小鼠皮肤中I型胶原及相关蛋白的表达情况，来研究血糖波动对小鼠皮肤胶原蛋白合成的影响。建立血糖波动小鼠模型八周后，取小鼠背部皮肤，制作石蜡切片，HE染色观察真皮组织的形态；提取小鼠皮肤总mRNA和总蛋白，用RT-PCR和Western-bloting检测肾脏中I型胶原蛋白和相关蛋白的表达情况。<br>　　 结果：表明，D组和DF组小鼠皮肤变薄，真皮层与肌肉组织间缺少脂肪组织，真皮层成纤维细胞排列较为松散，细胞间出现空隙。mRNA表达量：I型胶原，DF组低于D组，D组和N组无差异：MMP1，DF组高于D组，D组高于N组；Tgf-β1，DF组低于D组，D组低于N组。蛋白含量：I型胶原和TIMP1，DF组低于D组，D组低于N组；MMP1，DF组高于D组，D组高于N组。可见血糖波动能够减少糖尿病小鼠皮肤中胶原蛋白含量。综合以上三个部分的实验结果，我们可以得出如下结论：<br>　　 1.本实验建立了稳定的血糖波动糖尿病小鼠模型，这为今后进一步在动物水平研究血糖波动对糖尿病小鼠的影响及机制探讨提供了很好的实验材料和手段。<br>　　 2、研究发现血糖波动能显著增加糖尿病小鼠肾脏组织胶原蛋白含量，血糖波动是通过活化Tgf-β信号通路中Smads依赖的信号通路促进胶原蛋白合成增加的，因此血糖波动会造成肾脏纤维化的进一步加剧，导致糖尿病肾脏并发症的发生。<br>　　 3、研究发现血糖波动能够降低糖尿病小鼠皮肤中胶原蛋白含量，引起皮肤厚度变薄，细胞排列紊乱等现象。血糖波动能引起糖尿病小鼠皮肤中Tgf-βl含量下降，从而导致胶原合成和分泌的减少。