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摘要目的：和意义:骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是来源于骨髓的能向多种细胞分化的多潜能干细胞。实验表明MSCs能分化为心肌细胞fcardiomyocytes,CMs),MSCs移植于受损心脏,心功能得到改善。但研究亦发现,MSCs体内移植横向分化为心肌细胞效率低,修复受损心脏效果有限。因此促进MSCs向CMs分化,提高其分化效率,是优化MSCs治疗缺血性心脏病迫切需要解决的问题。microRNAs(miRNAs)是一类由基因组编码、高度保守的18-22个碱基长度的非编码RNAs。它通过降解mRNA或抑制蛋白质翻译而调控基因的表达。miRNA-1是新近发现的在心脏发育、肌分化过程中起重要调控作用的肌特异性miRNA。研究表NmiRNA-1能促进胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)、心脏祖细胞向CMs分化,诱导HeLa、C2C12细胞向肌细胞分化。miRNA-1能否调控MSCs向心肌样细胞分化目前尚不清楚。本研究通过构建大鼠miRNA-1真核表达载体,检测miRNA-1质粒转染MSCs后心肌相关基因的表达。探讨miRNA-1调控MSCsN心肌样细胞分化的影响。为提高MSCs向心肌细胞分化的效率,优化MSCs治疗缺血性心脏病提供新靶点。<br>　　 方法：应用PCR技术体外合成pre-miRNA-1对应的基因组片段,定向克隆到pSD11-U6/Neo/GFP载体上,构建大鼠miRNA-1真核表达载体。分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs。脂质体法转染大鼠第四代MSCs,实时定量RT-PCR(quantitative real-time RT-PCR,qRT-PCR)检测MSCs转染miRNA-1质粒后miRNA-1的表达。分别于转染2、4、6天后:RT-PCR检测心肌重要转录因子GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达,免疫荧光检测心肌特异蛋白Ⅰ(cardiactroponin-Ⅰ,cTnI)的表达。<br>　　 结果： PCR鉴定及DNA测序表明,miRNA-1真核表达载体构建成功。体外培养的大鼠第四代MSCs,细胞形态均一,呈长梭形生长。免疫荧光结果显示90％以上的MSCs表达整合素家族成员CD29、黏附分子CD44；不表达造血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45,符合MSCs特征。转染miRNA-1质粒48 h后,20-30％的MSCs表达GFP,qRT-PCR结果显示MSCs的miRNA-1表达明显上调。RT-PCR结果表明转染miRNA-1质粒后,GATA4、NKx2.5、MEF2C的表达随时间逐渐增强。免疫荧光结果显示转染miRNA-14、6天后可见cTnI阳性表达细胞。MSCs和空质粒对照组:RT-PCR结果显示无GATA4、NKx2.5表达,MEF2C表达无明显变化；免疫荧光未见cTnI阳性表达细胞。<br>　　 结论： miRNA-1质粒载体构建成功,转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表达水平明显上调；miRNA-1具有促进MSCs向心肌样细胞分化的重要作用,为MSCs移植治疗缺血性心脏病提供了新的靶点。