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摘要目的:乳腺癌是妇女中最常见的恶性肿瘤,严重影响女性健康和生活质量。三苯氧胺能够提高乳腺癌雌激素受体阳性患者的无病生存率和整体生存率,降低局部复发和同侧复发,在临床上应用广泛。近年来出现的三苯氧胺耐药现象严重限制了其疗效,是目前临床上的亟待解决的主要问题。研究证实来自黄荆果实的乙酸乙酯提取物Evn-50具有广谱抗肿瘤活性,可以抑制乳腺癌细胞在内的多种肿瘤细胞的生长和诱导细胞凋亡。本实验通过研究Evn-50在体外对人乳腺癌MCF-7和MCF-7/TAM-R细胞株的生长和凋亡的影响,探索Evn-50对乳腺癌TAM耐药细胞的作用及其作用机制,为以后进一步的实验研究和临床应用提供初步依据。<br>　　 方法:持续用5uM的TAM诱导内分泌治疗敏感的野生型人乳腺癌MCF-7细胞构建MCF-7/TAM-R细胞系;将每个细胞系分成四个亚组,分别加DMSO、5uMTAM、5uM TAM+50ug/ml Evn-50和50ug/ml Evn-50处理细胞;用MTT法测定细胞的活力和细胞存活率,用PI单染流式细胞术检测细胞凋亡率及G2/M期细胞比例,用免疫蛋白印记法观察Evn-50在对TAM耐药细胞株生长和凋亡影响中的作用机制。<br>　　 结果:正常MCF-7细胞与MCF-7/TAM-R细胞相比,前者加入TAM后显微镜下可见明显的细胞碎片,其生长呈明显下降趋势,应用MTT法检测细胞存活率,可以观察到加入TAM72h后正常MCF-7细胞的存活率较耐药组细胞明显降低,有显著性差异(**p＜0.01)。Evn-50单药或与TAM联合均可以抑制MCF-7、MCF-7/TAM-R的细胞活力并降低其细胞存活率,且两药联合时的作用更为明显,与control组和TAM组比较有显著性差异(**p＜0.01,*p＜0.05)。在Evn-50单药或与TAM联合均对MCF-7和MCF-7/TAM-R细胞的凋亡有明显影响,且随着作用时间的延长,细胞凋亡逐渐增多,在72h时,细胞凋亡率和G2期细胞比例的显著性差异最为明显(**p＜0.01)。Western Blot结果提示TAM和Evn-50单独或联合处理MCF-7细胞后,磷酸化AKT(Ser473)和p-MAPK44/42蛋白水平下调,而总AKT和MAPK44/42蛋白水平无变化。提示Evn-50可能通过下调AKT和MAPK信号通路来抑制人乳腺癌MCF-7细胞增长。而对MCF-7/TAM-R细胞,Evn-50与TAM单独使用,对磷酸化AKT(Ser473)和p-MAPK44/42蛋白水平均无明显影响,当两药联合使用时则具有降低磷酸化AKT(Ser473)和p-MAPK44/42蛋白水平的作用。<br>　　 结论:Evn-50能够抑制人乳腺癌MCF-7和MCF-7/TAM-R细胞株的生长并诱导细胞凋亡,尤其在和TAM两药联合应用的时候,对MCF-7/TAM-R细胞株抑制生长和诱导凋亡的作用更加显著。其作用机制目前尚未完全阐明,可能与AKT和MAPK的信号通路的下调相关,但需要进一步实验研究证实,是我们接下来的研究重点。