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摘要农药在我国农业生产中广泛使用,给人类带来巨大经济利益的同时,也对生态环境造成了一定程度的污染。近年来,两栖类种群数量在全球范围内急剧减少,已有研究证明两栖类种群衰退与农药污染有关。基于这样的背景,论文选用我国农业上常用的三种酰胺类除草剂乙草胺、丙草胺、丁草胺,以热带爪蟾(X.tropicalis)为对象,从分子、细胞、组织、个体等不同的生命层次,初步研究了三种除草剂对热带爪蟾早期发育的影响,以期丰富农药对两栖动物的生态毒理学内容。<br>　　 首先开展了三种除草剂对两种模式生物(非洲爪蟾和热带爪蟾)的急性毒性测定,了解三种除草剂对两个物种的毒性大小。结果表明三种除草剂对两种爪蟾蝌蚪均属中等毒性,且毒性大小为丁草胺>乙草胺>丙草胺,热带爪蟾对三种药剂相对敏感。因此,后续试验选择热带爪蟾为研究对象。<br>　　 接下来利用爪蟾胚胎致畸实验(FETAX)、组织切片技术和整体原位杂交技术,研究了三种酰胺类除草剂对热带爪蟾胚胎的致畸效应。胚胎毒性测定和FETAX结果显示三种除草剂对胚胎致死中浓度依次为2.26mg/L,4.67mg/L和1.06 mg/L;致畸中浓度依次为1.2mg/L,3.84mg/L和0.63mg/L;TI值(致畸指数)分别为1.88,1.22和1.68,说明乙草胺和丁草胺具有潜在的致畸风险。另外,三种除草剂都能够诱导热带爪蟾胚胎产生多种畸形情况,例如腹部水肿、面部畸形、脊柱弯曲、尾巴弯曲、头部畸形等等。为了验证头部畸形是否由于早期软骨发育异常造成,对畸形个体的头部进行了切片观察。结果发现畸形个体头部的软骨发育轮廓与对照组具有明显差异,且异常导致脑室变小。然后选取与软骨发育相关的Sox9基因和与脑发育相关的Dmrt5基因,利用整体原位杂交技术检测药剂处理后在胚胎中的空间表达情况。结果显示丁草胺造成了Sox9基因的表达不对称,同时抑制了Draft5的表达量。由此可以说明Sox9和Dmrt5基因是丁草胺的候选靶基因。试验首次发现药剂影响后基因表达不对称现象,为生态毒理学中研究基因表达分析提供了新的研究思路。<br>　　 除了胚胎期的致畸效应外,还对热带爪蟾蝌蚪期的DNA损伤进行了检测。热带爪蟾47期蝌蚪暴露于三种除草剂的亚致死浓度4天后,对红细胞微核检测结果显示,血细胞的微核率和核异常率在中、高浓度组显著高于对照组,说明三种农药能够对染色体造成伤害;另外通过彗星试验检测药剂对红细胞DNA的损伤作用,结果显示DNA损伤指标随乙草胺、丙草胺、丁草胺浓度的增加而增加,并呈现显著的线性相关关系;本试验可以得出如下结论:三种除草剂能够改变蝌蚪的遗传物质,造成DNA损伤。此结果也为进一步筛选出合适的生物标志物提了供科学依据。