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摘要TBXl(GeneID:6899)基因定位于染色体22q11.21,胞内定位于细胞核,全称为T-boxl,属于T-box转录因子家族,后者在种系发生和进化中趋于保守,因其成员均包含一个相同的DNA结合域,即T-box而得名。近期研究发现,TBX1基因可影响包括耳、心脏、甲状旁腺、胸腺、牙齿等多种组织和器官的发育,并在精神疾病的发病中扮演一定角色。<br>　　 多项研究提示泌尿生殖系统发育缺陷与染色体22q11.2微缺失密切相关,具体的畸形可涉及肾脏、输尿管/膀胱以及尿道等,畸形发生率高达36％,显著高于自然人群。TBX1基因是定位于上述缺失关键区内的关键基因。围绕TBX1基因的研究提示,TBX1基因可能通过剂量依赖形式,影响SHH、FGF、WNT以及BMP等相关信号通路,进而调控包括肾脏、心脏、耳、胸腺、甲状旁腺在内的多种组织器官的发育。动物实验亦证实,Tbx1基因缺失或单倍剂量不足可导致类似于人类22q11.2微缺失综合征的表型。<br>　　 迄今为止,围绕TBX1基因的研究主要集中于其与心脏畸形的关系,而该基因是否与泌尿生殖系统畸形的发生存在联系尚未见报道。在本研究中,我们以小鼠为对象,对Tbx1基因在肾脏发育过程中的表达进行了检测,之后,通过获取其相互作用蛋白和RNA干扰实验,对该蛋白以及其相互作用蛋白在发育中的角色进行进一步探索,以期初步揭示调控肾脏发育的分子网络。<br>　　 材料与方法：<br>　　 一、实验材料<br>　　 1、健康昆明小鼠<br>　　 2、Western Blot相关试剂<br>　　 3、RT-PCR实验相关试剂<br>　　 4、免疫沉淀实验相关试剂<br>　　 5、细胞培养及转染相关试剂<br>　　 二、实验方法<br>　　 1、取胚龄为E13.5d、E15.5d、E17.5d、E19.5d,新生鼠以及正常成年昆明小鼠的肾脏组织,抽提RNA,分析Tbx1基因在小鼠不同发育时间点的表达情况。<br>　　 2、免疫沉淀获取Tbx1的相互作用蛋白并进行质谱分析,通过Western Blot对结果进行验证,半定量RT-PCR分析该基因的时间表达情况。<br>　　 3、干扰Tbx1及其相互作用蛋白的表达以确认二者的相互影响。<br>　　 实验结果<br>　　 1、Tbx1基因的表达在胚鼠肾脏发育的第E15.5天达到第一个峰值,随后逐渐减弱,至出生时又剧烈增高,达到第二峰值。此外,该基因在小鼠成体肾脏中存在低水平表达。<br>　　 2、在小鼠的胚。肾组织中,Hoxd10与Tbx1存在蛋白之间的相互作用。<br>　　 3、在小鼠成肌细胞系C2C12中,干扰Hoxd10可以使该基因及Tbx1的表达量下调；干扰Tbx1则可以使该基因及Hoxd10的表达下调。<br>　　 结论：<br>　　 1、Tbx1基因的表达水平随小鼠肾脏的发育而剧烈变化,提示其可能在肾脏的发育过程中扮演重要角色,并可能在成体肾脏中发挥某种功能。<br>　　 2、在小鼠的胚肾组织中Tbx1蛋白可能与Hoxd10蛋白存在相互作用,共同调节肾脏的发育。<br>　　 3、在蛋白水平,Tbx1与Hoxd10之间可能存在调节和反馈作用。