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摘要在以往的研究中，本课题组挑选具有细胞周期依赖性染色的自身免疫病人抗体进行Hela细胞cDNA文库筛选，鉴定出一个与经典细胞核有丝分裂器蛋白NuMA定位相似的细胞核微管结合蛋白CDCA4(celldivisioncycleassociated4)。CDCA4的定位随细胞周期发生特异性的变化：间期在核仁中富集，胞质中也有分布；分裂期迁移至中心体；后期除在纺锤体极有分布外，在中板位置也有定位；到分裂末期，则重新回到子细胞核中。利用RNAi技术降低CDCA4的表达量，多核、多中心体等异常细胞的比例显著增加。这些结果都表明CDCA4在调节细胞周期进程方面发挥着重要作用。此次研究的目的就在于，利用过表达技术，进一步分析CDCA4在细胞周期调控方面的作用。同时，通过寻找并鉴定CDCA4的相互作用蛋白，研究其在细胞内的具体生物学功能。<br>　　 研究工作主要围绕以下四部分展开：<br>　　 首先，筛选获得CDCA4的过表达稳定克隆细胞株后，过表达细胞出现了生长速度降低、G2/M期阻滞、多核、多中心体细胞比例增加等一系列异常现象。这些结果与RNAi结果相互吻合，表明CDCA4很有可能是一个抑制细胞增殖的调控因子。并且，与对照组相比，过表达细胞在形态上也发生了异常变化，梭形细胞减少，圆形细胞增多，贴壁细胞数降低，这些结果显示CDCA4.是细胞分裂过程中的重要调控因子。<br>　　 另外，对体外表达的CDCA4进行纯化，并通过pulldown试验及质谱鉴定，成功寻找出一个CDCA4的互作候选蛋白IQGAP1(IQmotifcontainingGTPaseactivatingprotein1)。后续展开的免疫共沉淀试验也支持IQGAP1与CDCA4为一对相互作用蛋白这一结果。并且，在CDCA4过表达细胞株中，IQGAP1的表达量显著降低，表明CDCA4与IQGAP1在细胞内存在密切关系。<br>　　 同时，利用FLAG标签抗体，通过免疫沉淀技术获得了一系列CDCA4的互作候选蛋白，但是这些蛋白与CDCA4在体内是否存在相互作用仍有待于进一步的试验验证。<br>　　 最后，CDCA4的理论分子量为26KD，而WesternBlot显示其表观分子量为34KD，这极有可能是磷酸化等蛋白修饰的结果。本组利用双向电泳及WesternBlot试验，证实了CDCA4在体内多种修饰形式的存在。并通过对比中期及间期蛋白样品的WesternBlot结果，推测CDCA4的蛋白修饰随细胞周期进程而改变。