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摘要第一部分:大鼠高脂血症模型的建立及wnt/β-catenin信号通路在该模型中的激活情况<br>　　 目的:建立大鼠高脂血症模型,观察活体内高脂刺激下血管平滑肌细胞内wnt/β-catenin信号通路的激活及血管平滑肌细胞增殖情况,探讨活体内wnt/β-catenin信号通路的激活与血管平滑肌细胞增殖的关系。<br>　　 方法：以雄性SD大鼠为研究对象,体重200～250g。通过饮食饲以高脂饲料建立高脂血症模型。12周后处死大鼠,获取主动脉。苏丹Ⅲ染色检测血管壁粥样硬化病变,HE染色、透射电镜检测血管平滑肌细胞增殖及表型变化,实时定量RT-PCR及Western Blot检测β-catcnin、T cell factor4(TCF-4)、cyclin D1的变化。<br>　　 结果：通过2个月的高脂饮食饲养,成功建立大鼠高脂血症模型,但大鼠主动脉壁粥样硬化病变不明显。高脂刺激下,mRNA及蛋白水平的β-catenin、TCF-4、cyclin D1表达均增加；同时血管壁内平滑肌细胞增殖增加、表型由收缩型向合成型变化。<br>　　 结论：高脂饮食可以成功建立大鼠高脂血症模型,但由于大鼠本身的代谢特点,不容易出现动脉粥样硬化斑块。wnt/β-catenin信号通路在高脂情况下被激活,同时平滑肌细胞增殖增加、表型改变,提示wnt/β-catenin信号通路的激活与平滑肌细胞增殖之间存在联系。<br>　　 第二部分:Wnt/βcatenin信号通路在高脂血清培养的血管平滑肌细胞中的激活情况<br>　　 目的:通过高脂血清培养大鼠血管平滑肌细胞,观察高脂刺激下血管平滑肌细胞内wnt/β-catenin信号通路的激活及血管平滑肌增殖情况,细胞水平下探讨Wnt/β-catenin信号通路的激活与血管平滑肌细胞增殖的关系。<br>　　 方法：以组织贴块法培养获取原代大鼠血管平滑肌细胞,给予高脂血清刺激,实时定量RT-PCR及Western Blot检测β-catenin、TCF-4、cyclin D1的变化。流式细胞仪检测血管平滑肌细胞凋亡及细胞周期的变化,MTT检测细胞增殖情况。<br>　　 结果：成功获取并培养大鼠血管平滑肌细胞。在高脂血清的刺激下,mRNA及蛋白水平的β-catenin、TCF-4、cyclin D1表达均增加；血管平滑肌细胞增殖活跃,S期细胞数量明显增加,凋亡细胞减少。<br>　　 结论：组织贴块法能够成功获取并培养原代大鼠血管平滑肌细胞,该方法简便易行。Wnt/β-catenin信号通路在高脂血清刺激下被激活,同时平滑肌细胞增殖增加,在细胞水平提示wnt/β-catenin信号通路的激活与平滑肌细胞增殖之间存在联系。<br>　　 第三部分:Wnt/β-catenin通路阻断对高脂血清培养的血管平滑肌细胞增殖的影响<br>　　 目的: 通过高脂血清培养大鼠血管平滑肌细胞,并给予wnt/β-catenin信号通路阻断剂,观察通路阻断情况下血管平滑肌细胞内wnt/β-catenin信号通路的激活及平滑肌细胞增殖情况,进一步探讨wnt/β-catenin信号通路的激活与血管平滑肌细胞增殖的关系。<br>　　 方法：高脂血清培养血管平滑肌细胞的同时给予wnt阻断剂Dickkopf-1(Dkk-1),实时定量RT-PCR及Western Blot检测β-catenin、TCF-4、cyclin D1的变化。流式细胞仪检测血管平滑肌细胞凋亡及细胞周期的变化,MTT检测细胞增殖情况。<br>　　 结果：在Dkk-1的作用下,mRNA及蛋白水平β-catenin、TCF-4、cyclin D1表达均较高脂血清刺激下减少；平滑肌细胞增殖变缓,S期细胞数量减少,凋亡细胞增加。<br>　　 结论：<br>　　 高脂血清激活的wnt/β-catenin信号通路能够被wnt阻断剂所阻断,同时血管平滑肌细胞增殖变缓；提示高脂血清内可能存有wnt蛋白的表达,同时也说明wnt/β-catenin信号通路的激活可能导致血管平滑肌细胞的增殖。