换一批
换一批摘要目的:构建插入IL-18基因和PCNA的HLA-A2限制性CTI,表位的六聚体的真核表达质粒PCNA(6)/IL-18-pIRES,并且成功体外培养人树突状细胞和T细胞。下一步构建DC疫苗奠定基础。<br> 方法:通过基因银行获取PCNA基因HLA-A2限制性CTL表位的筛并构建其片段的六聚体PCNA(6),以及全基因合成IL-18,把其装到pBluescriptⅡ SK(+)载体质粒上经限制性核酸内切酶SalⅠ/NotⅠ和XhoⅠ/MluⅠ酶切后分别装到真核质粒pIRES。并进行琼脂糖电泳及测序鉴定,人外周血培养树突状细胞和T细胞。<br> 结果:目的基因PCNA片段的筛选和IL-18基因片段合成见测序图分别经1.0％琼脂糖凝胶电泳和基因测序证实,成功构建了插入PCNA(6)和IL-18基因于真核质粒pIRES中。体外成功培养树突状细胞和T细胞。<br> 结论:<br> 1.成功筛选出PCNA的HLA-A2限制性CTL表位并成功合成其六聚体。<br> 2.成功地构建了含PCNA的HLA-A2限制性CTL表位并成功合成其六聚体并重组真核表达质粒PCNA(6)-pIRES。<br> 3.成功地构建了含IL-18并重组真核表达质粒PCNA(6)/IL-18)-pIRES。<br> 4.成功体外培养人树突状细胞和T细胞。
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