检索历史 清除

摘要球孢白僵菌对环境温度变化的响应，是影响其孢子制剂对田间害虫防治效果稳定性的关键因素之一。本研究开展了球孢白僵菌抗逆相关基因BbAGT1编码的α-葡萄糖苷转运蛋白的功能分析，并对该菌热激响应相关基因进行了分离筛选，主要结果如下：<br>　　 球孢白僵菌BbAGT1基因克隆、敲除及功能分析从球孢白僵菌Bb2860菌株中克隆了BbAGT1基因，该基因全长1883 bp，含四个外显子和三个内含子，编码565个氨基酸，编码蛋白的预测分子量为63.65 kDa，等电点约为5.52。BbAGT1拥有MFS转运蛋白家族的底物结合位点，与21种已知真菌的α-葡萄糖苷转运蛋白的同源性高达90‰-99％。通过根癌农杆菌介导的真菌转化方法构建使该基因缺失的敲除菌株，经PCR及Southern杂交鉴定后进行表型分析。结果显示，同野生株相比，基因敲除株△BbAGT1的孢子萌发速率、菌丝生长和产孢量分别下降66％、64％及90％，分生孢子抗氧化、耐48。C高温胁迫、耐UV-B紫外辐射的能力以及对蚜虫的毒力分别下降27％、22％、28％及14％。由此证明，BbAGT1基因在球孢白僵菌抗逆力及侵染力的利用过程中起到了重要的作用。<br>　　 球孢白僵菌热激响应基因的筛选采用抑制消减杂交技术构建Bb2860菌株热胁迫下的差异表达cDNA文库，从中筛选出28个热激响应上调基因。通过比对分析，大部分基因与已知功能基因如物质运输、基础代谢及胁迫响应类基因具高度同源性。运用荧光实时定量PCR测定其中的12个基因在40℃热激15、30、60、120min后的相对表达水平，发现这些基因的表达模式各不相同，并都随热激时间而变化。由此说明，菌体在热激的不同阶段依次启动不同的应激方案来应对热激胁迫。<br>　　 综上所述，球孢白僵菌BbAGT1基因功能和热激响应基因的分析结果，在一定程度上深化了球孢白僵菌抗逆机制的认识，为利用抗逆相关功能基因遗传改良菌株、提高生防真菌制制剂的田间稳定性增加了知识和基因资源贮备。