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摘要第一部分、猪骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定<br>　　 目的：分离纯化并扩增猪骨髓间充质干细胞，进行生物学鉴定。<br>　　 方法：1、无菌条件下从猪髂后上棘抽取骨髓，采用密度梯度离心法分离获取骨髓单个核细胞；2、通过贴壁培养不断传代，纯化并扩增猪骨髓间充质干细胞；3、传代至P5代，利用流式细胞仪检测细胞表面标志进行细胞鉴定。<br>　　 结果：1、原代培养细胞呈集落样生长，传代后细胞呈均匀生长，类似成纤维细胞；2、流式细胞法鉴定第5代MSCs显示表达CD90、CD29阳性细胞95％以上；<br>　　 结论：采用密度梯度离心及贴壁培养可以分离纯化猪骨髓间充质干细胞。传代后细胞逐渐纯化，可作为种子细胞进行下一步实验。<br>　　 第二部分、菲立磁标记猪骨髓间充质干细胞及体外MR成像<br>　　 目的：应用菲立磁和多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine，PLL)的复合物FE-PLL标记猪骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)，并进行体外MR成像。<br>　　 方法：1、制备含FE-PLL复合物的培养液，含铁浓度分别为200ug/ml、100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、10ug/ml、5ug/ml，用含25ug/ml浓度FE-PLL培养液加入猪骨髓MSCs孵育过夜进行标记，普鲁士蓝染色鉴定细胞内铁；2、CCK-8实验绘制生长曲线，评价磁标记对细胞活力及增殖的影响；3、磁标记细胞及未标记细胞体外在磁共振T1WI、T2WI、FFE序列行细胞成像。<br>　　 结果：1、普鲁士蓝染色显示FE-PLL标记MSCs胞内可见蓝染颗粒，标记率几乎100％；2、CCK-8检测细胞增殖显示含铁浓度50ug/ml以下为安全浓度，对细胞生长基本无影响；3、在磁共振的T2WI、FFE序列中，磁标记MSCs较未标记MSCs均有信号降低改变，以FFE的信号强度变化率最大。<br>　　 结论：应用FE-PLL复合物可以有效的标记猪骨髓MSCs，一定浓度范围内对细胞活力及增殖无明显影响，1.5 T磁共振可在体外进行磁标记细胞成像。<br>　　 第三部分、磁标记猪骨髓间充质干细胞自体肝内移植后MR活体示踪<br>　　 目的：磁标记猪骨髓间充质干细胞，经门静脉自体肝内移植，探讨应用1.5T MR进行活体示踪的可行性。<br>　　 方法：1、采用D-氨基半乳糖盐酸盐建立急性肝衰竭模型；2、采用0.5g/kg剂量建立急性肝损伤模型，做为实验组A(n=6)，另对照组(n=4)为正常肝脏，经门静脉移植磁标记细胞；3、分别移植前、移植后6h、3d、7d、14d行磁共振FFE序列活体成像；4、MR扫描后处死动物，肝脏组织切片普鲁士蓝染色。<br>　　 结果：1、实验组A磁标记细胞移植后6h肝脏有明显信号改变，随时间延长，信号逐渐减弱，14d后无明显信号变化；2、实验组B移植7d无信号改变；3、普鲁士蓝显示蓝染阳性细胞位于肝实质内。<br>　　 结论：1.5 T磁共振仪可对磁标记的MSCs经门静脉肝内移植后进行MR活体示踪。<br>