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摘要机体损伤后失控的炎症反应会导致器官功能障碍或功能衰竭,这一直是临床面临的一个难题。导致机体损伤常见的原因包括败血症、严重烧伤、急性胰腺炎、失血性休克和严重创伤等。急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征是各种病因导致的多器官功能衰竭的最常见的形式,是机体受损伤后死亡的主要原因,病死率很高。炎症介质如肿瘤坏死因子在急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的发生发展中扮演了重要角色。肺微血管内皮细胞是肺组织和血液之间的屏障。肿瘤坏死因子可刺激肺微血管内皮细胞产生和释放细胞间粘附分子1和白介素8。这两者在中性粒细胞的肺部聚集和浸润中起重要作用。研究细胞间粘附分子1和白介素8的产生和释放的调控机制对于研发有效的治疗急性肺损伤的抗炎药物具有重要的意义。本研究首次阐明p38 MAPK-MK2信号通路在肿瘤坏死因子-alpha(TNF)诱导的人肺微血管内皮细胞表达细胞间粘附分子-1和白介素8等前炎症因子中的转录后调控作用。<br>　　 第一部分<br>　　 TNF诱导的微血管内皮细胞炎症反应是急性肺损伤的一个重要的早期事件。现有研究表明,丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)、MAPK活化蛋白激酶2(MK2)和热休克蛋白27(HSP27)在不同的细胞类型中参与调节多种促炎症因子的表达。然而,在TNF诱导的肺微血管内皮细胞炎症反应中,他们的作用还不清楚。在本文中,我们分别研究了这三种蛋白在TNF诱导的人肺微血管内皮细胞细胞间粘附分子-1和白介素8的表达中的调节作用。结果发现,使用特异性抑制剂SB203580抑制p38 MAPK导致TNF诱导的细胞间粘附分子-1和白介素8的蛋白表达减少,但并不影响核转录因子NF-κ3的活化以及细胞间粘附分子-1和白介素8 mRNA水平。细胞外信号调节激酶(ERK1/2)对TNF诱导的细胞间粘附分子-1和白介素8的表达没有明显影响。TNF可以诱导依赖于p38 MAPK的MK2和HSP27磷酸化。使用RNA干扰技术使得MK2基因沉默也明显减少细胞间粘附分子-1和白介素8的蛋白表达,但并不影响核转录因子NF-κ3的活化以及细胞间粘附分子-1和白介素8 mRNA水平。使用RNA干扰技术使得HSP27基因沉默明显减少了细胞HSP27水平以及TNF刺激后HSP27的磷酸化。但是,这一变化对于TNF诱导的细胞间粘附分子-1和白介素8的表达没有影响。本研究首次证实p38 MAPK-MK2信号通路调节TNF诱导的人肺MVECs的细胞间粘附分子-1和白介素8的蛋白表达,并且此调节作用在转录后水平。这一调节作用不依赖于HSP27的活化。<br>　　 第二部分<br>　　 人肺微血管内皮细胞受到循环中的TNF刺激后可释放多种趋化因子。高浓度的趋化因子可募集大量中性粒细胞至肺部聚集,其后导致急性肺损伤的形成。我们前面的研究中已经显示p38 MAPK-MK2信号通路在转录后水平调节细胞间粘附分子-1和白介素8的表达。这一调控可能通过细胞间粘附分子-1和白介素8 mRNA3’末端非翻译区的富含腺嘌呤和尿嘧啶的AREs元件(adenine/uridine-rich elements)发挥作用。本研究评价了p38 MAPK-MK2信号通路在调控TNF诱导的人肺微血管内皮细胞表达趋化因子白介素8,单核细胞趋化因子-1,正常T细胞表达和分泌因子和可诱生蛋白-10中的作用。在这四种趋化因子中,白介素8mRNA具有AREs元件,而其余三个没有AREs元件。抑制p38 MAPK减少了白介素8,正常T细胞表达和分泌因子和可诱生蛋白-10的释放,但是不影响单核细胞趋化因子-1的水平。使用RNA干扰技术使得MK2基因沉默也减少了白介素8,正常T细胞表达和分泌因子和可诱生蛋白-10的释放,同时并不影响单核细胞趋化因子-1的水平。本研究首次证实p38 MAPK-MK2信号通路调节调控TNF诱导的人肺微血管内皮细胞部分趋化因子的表达,此机制与AREs无关。