检索历史 清除

摘要目的：构建人生存素(survivin)的多表位真核表达载体，观察荷载人生存素的多表位树突状细胞疫苗的抗乳腺癌活性。<br>　　 方法：人工合成含4个survivin的HLA-A2类限制性CD8+CTL细胞表位和一个CD4+Th细胞表位的重组cDNA片段及含4个CD8+CTL细胞表位的重组cDNA片段。构建重组真核表达质粒pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th及pPIRESneo3.0-survivin(4)，酶切鉴定、测序分析。外周血分离培养人树突状细胞（Dendritic，DC）和T淋巴细胞，运用流式细胞仪分别检测DC表面CD83、CD86、T淋巴细胞表面CD4、CD8a表达情况。将重组质粒转染HLA-A2阳性的人DC，制备DC疫苗。DC疫苗与T淋巴细胞共培养后，ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。效应T淋巴细胞与靶细胞共培养后，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测DC疫苗诱导的CTL对靶细胞的抑制率；流式细胞仪检测DC疫苗作用后靶细胞的凋亡情况。<br>　　 结果：经酶切鉴定和测序分析，成功构建了pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th和pPIRESneo3.0-survivin(4)重组真核表达质粒，流式细胞仪显示人DC高表达CD83、CD86;人外周血T淋巴细胞高表达CD4、CD8a;survivin(4)/Th组的IFN-γ的含量（66.50±3.34pg/ml），明显高于survivin(4)组（46.10±1.35pg/ml）、空质粒组（25.17±0.32pg/ml）、未转染DC与T细胞共培养组（25.47±0.95pg/ml）和单独T淋巴细胞组（23.73±0.50pg/ml），P＜0.05。survivin(4)/Th组的MCF-7细胞的抑制率明显高于survivin(4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组，P＜0.05;各组效应细胞对EC-304细胞无明显的抑制作用。DC疫苗作用后survivin(4)/Th组的MCF-7细胞的凋亡率（10.63±0.29％）高于survivin(4)组(6.48±0.41％)，P＜0.05；亦明显高于空质粒组（3.74±1.04％）、未转染DC与T细胞共培养组（3.32±0.98）和单独T淋巴细胞组(3.74±1.01％)，P＜0.05。DC疫苗作用后EC-304细胞各组凋亡率与MCF-7细胞的空质粒组和单独T淋巴细胞组相近，差异无显著性(P＞0.05)。<br>　　 结论：成功地构建了含有survivin的多表位真核表达载体，荷载多个survivin CD8+CTL细胞表位的树突状细胞肿瘤疫苗具有很强的抗肿瘤效果，CD4+Th细胞对CD8+CTL发挥抗肿瘤细胞效能方面有明显的促进作用。