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摘要七鳃鳗作为脊椎动物最直接的祖先,为探索脊椎动物适应性免疫演化提供了丰富的遗传信息。对七鳃鳗免疫基因的研究为我们了解适应性免疫的起源与演化提供了参考。主要组织相容性复合体(Maior Histocompatibility Complex,MHC)是脊椎动物中发现的编码免疫球蛋白样受体(Immunoglobulin-like receptors)的重要的非特异性免疫基因之一。MHC可分为MHCⅠ、MHCⅡ和MHCⅢ等三类,MHCⅡ是由α链和β链非共价键组成的编码细胞表面糖蛋白的异源二聚体,有两种亚型A和B,MHCⅡB基因编码的β1和β2区的第2和第3个外显子及两个外显子之间的内含子,具有高度多态性,在免疫应答中起重要的调控作用,同时对于抗病性研究具有重要意义。目前关于MHC的研究主要集中在硬骨鱼及哺乳动物,七鳃鳗中是否存在MHC尚不明确。本论文利用分子生物学手段和生物信息学方法,首次从日本七鳃鳗(Lampetra japonica)白细胞中获得了MHCⅡB基因片段,对其基因进行克隆、表达和生物信息学分析,有助于揭示七鳃鳗MHCⅡB基因与无脊椎动物和脊椎动物间的适应性免疫进化关系,同时为进一步阐述脊椎动物MHCⅡ家族的起源和进化提供了理论依据。<br>　　 本研究运用RACE,半定量RT-PCR,生物信息学等技术,以草鱼为克隆对照组,首次成功克隆获得日本七鳃鳗(Lampetra japonica)非特异性免疫因子MHCⅡB基因,cDNA序列全长为1209bp,含有3’UTR、启动子、多肽结合区(β1)、IGC区(β2)、跨膜区、胞质区和5’UTR区,编码区大小为834bp,分别编码277个氨基酸。氨基酸序列分析发现日本七鳃鳗MHCⅡB分子具有经典MHC蛋白分子的空间结构,属于alpha+beta型蛋白。β1区含有糖基化位点(NST)；酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点；在β1、β2及跨膜区都含有豆蔻酰化位点。<br>　　 此外,与24个不同物种的MHCⅡB氨基酸序列进行比对分析,构建了脊椎动物的系统进化树,结果表明日本七鳃鳗MHCⅡ B的氨基酸序列拥有经典MHCⅡB结构形成所需的半胱氨酸,并且该分子的β2区氨基酸序列可以作为研究脊椎动物物种间进化关系的良好标记。并应用半定量RT-PCR检测方法对七鳃鳗的MHCⅡB基因表达特点进行了分析,结果显示在鳃、心脏、血液中高表达,在肾脏有少量表达,在皮肤,肌肉,肝脏,肠,性腺,均不表达。<br>　　 结论:无颌类日本七鳃鳗MHCⅡB基因的发现,为我们更好了解适应性免疫系统的起源和进化提供了线索。同时为探索MHCⅡB基因的进化机制奠定了基础。