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摘要Tgf-β生长因子在肺发育过程中对胎儿及新生儿肿发育过程中肺上皮细胞的生长、分化、免疫调节、细胞外基质的合成及肺组织损伤后的修复等过程都起着着重要的作用。BMPs是Tgf-β超家族中的一个重要组成部分，而Smad1是BMP信号转导途径中重要的细胞内信号分子，BMP的信号传导过程始于对跨膜的BMPⅠ型和Ⅱ型受体的激活，激活的Ⅰ型受体对下游负责胞内信号传导的Smad1/5/8进行磷酸化，此后Smad1/5/8再与胞内的Smad4结合，并以复合体的形式进入细胞核内与特异性转录因子一起调节相关基因的表达。而通过敲除小鼠肺上皮细胞中的BMP基因抑制其表达会造成胎鼠产前肺发育畸形等致死性结果。所以，针对这条重要的信号通路以及其中涉及的各种信号分子之间作用的探索近年来成为了肺发育与疾病领域中研究的热点问题。<br>　　 发育过程中，小鼠胚胎肺上皮细胞中敲除Smad1会导致其分化过程受到影响，并会最终导致新生呼吸衰竭。而Smad1本身作为一种细胞内信号分子其作用的发挥需要互作蛋白的协助。因此本实验通过酵母双杂交体系对E18.5天小鼠胚胎肺文库中与Smad1可能存在相互作用的蛋白进行筛选，并用多种方式对前期筛选出的chmp1b是否与Smad1在体内及体外存在相互作用进行初步确认，同时检查chmp1b其在不同发育阶段肺内的表达水平，为研究TGF-β信号通路对肺发育的影响探寻新的思路<br>　　 方法：<br>　　 1、酵母双杂交文库的建立<br>　　 2、Smad1诱饵载体的构建<br>　　 3、Smad1酵母互作蛋白的筛选<br>　　 4、chmp1b与Smad1不同结构域的酵母体外小规模mating互作验证确认<br>　　 5、pcmb1质粒的构建。<br>　　 6、chmp1与Smad1的细胞内荧光共定位实验<br>　　 7、Halo-tag pull down验证chmp1b与Smad1的互作<br>　　 8、用Realtime PCR检测不同发育阶段肺组织chmp1b表达量水平<br>　　 结果：<br>　　 1、小鼠E18.5酵母双杂交文库建立完成。<br>　　 2、构建了Smad1诱饵载体并通过酵母互作蛋白筛选体系筛选出640个酵母克隆菌株<br>　　 3、通过体外小规模mating实验确认酵母中chmp1b与Smad1的MH2区互作<br>　　 4、pcmb1质粒的构建成功。<br>　　 5、chmp1b与Smad1细胞内荧光共聚焦实验显示在胞核和胞浆中存在共定位<br>　　 6、Halo-tag pull down实验结果证明chmplb与Smadl可能存在体外互作。<br>　　 7、用Realtime PCR检测不同发育阶段肺组织chmp1b表达量水平，发现chmp1b表达水平随末梢肺组织分化程度的增加而升高。<br>　　 结论：<br>　　 chmp1b是与肺发育相关的蛋白，它可能与Smad1存在互作关系。