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摘要CA是日本在1984年从一种链霉菌(Streptomyces tssukubaensis)No999的发酵产物中分离得到的大环内酯类免疫抑制剂。作为一种强效的新型免疫抑制剂，本品对T细胞具有选择性的抑制作用，主要是通过抑制TH细胞释放IL-2、IL-3、IFN-γ，以及抑制IL-2R的表达而发挥其强大的免疫抑制作用。CA的免疫抑制作用是环孢霉素A(CsA)的10-100倍且具有较低的不良反应，同时可逆转已发生的排异反应，因此CA已广泛应用于肝、肾等多种器官移植的免疫抑制治疗。<br>　　 由于CA在水中的溶解度极低，溶解度仅为2-3μg/mL，口服给药时往往不能完全吸收，限制了其药理作用的充分发挥。纳米混悬技术是近几年发展起来的一种纳米载药系统，它能够提高难溶性药物饱和溶解度和溶出速率，提高难溶性药物的生物利用度；另外，具有制备工艺简单、载药量高等特点。本研究将纳米混悬技术引入CA的制剂研究中，这对其它难溶性药物的制剂研究具有参考意义。<br>　　 目的：选择合适的处方和工艺，制备CA纳米混悬液，并通过冷冻干燥将其制成纳米冻干粉。对CA混悬液中纳米粒子的微观形态进行相关表征。建立CA体内、外分析方法，对CA纳米混悬剂的理化性质和稳定性进行研究，并对其生物利用度进行考察。<br>　　 方法：<br>　　 1.CA纳米混悬剂的制备：在预实验的基础上，初步确定CA纳米混悬液的制备方法，并以纳米粒粒径、多分散性和Zeta电位为评价指标对表面活性剂种类、表面活性剂用量、药物浓度和高压匀质工艺参数等因素进行了单因素考察，并通过四因素三水平正交实验设计，最终确定制备CA纳米混悬液的最佳处方和工艺条件。在研究中发现CA纳米混悬液在长期储存过程中纳米粒子会发生聚集和沉降现象，因此将纳米粒进行冷冻干燥以提高制剂的稳定性。<br>　　 2.CA纳米混悬剂的质量评价：用透射电镜对纳米粒的形状和表面形态进行考察，并用粒径分布仪对粒径分布进行统计，用Zeta电位分析仪测定其Zeta电位，HPLC法测定含量和相关物质。<br>　　 3.CA纳米混悬剂的稳定性试验：按最佳处方制备CA纳米混悬剂冻干粉，分别进行高温试验、高湿试验、强光照射试验、加速试验和长期稳定性试验，对其稳定性进行考察。<br>　　 4.CA纳米混悬剂的药代动力学研究：以健康雄性家犬为试验动物，采用单剂量、双周期自身交叉试验方案设计，考察口服CA纳米混悬剂胶囊的药代动力学，并与参比制剂进行比较。采用液相色谱-串联质谱法测定不同时间的血药浓度。采用3p97程序对血药浓度数据进行处理，对比两制剂在家犬体内的生物利用度。<br>　　 结果：<br>　　 1.通过预实验确定采用沉淀法与高压均质法联用技术制备纳米混悬剂。最佳制备处方和工艺为：将200mg表面活性剂泊洛沙姆188和29助悬剂HPMC溶于100mL水制备水相；CA溶于乙醇形成药物溶液有机相，药物浓度为2mg/ml;将CA药物溶液有机相滴加到室温搅拌下的水相中；将此粗混悬液置于高压匀质机，在1300bar压力下循环16次，制备CA纳米混悬液，加入合适的冻干保护剂，采用冷冻干燥法将CA纳米混悬液冻干。<br>　　 2.CA纳米粒的平均粒径为254nm，多分散指数较小(PI=0.016)，Zeta电位为-27.0mv，纳米粒为球形或近球形颗粒；CA纳米混悬剂的溶出速度较原药有明显提高；稳定性试验结果表明CA纳米混悬剂在60℃条件下样品外观、粒径、含量无明显变化；相对湿度92.5％条件下，重量变化不明显，样品外观、粒径和含量均无明显变化；在强光4500±500 lx的条件下，外观、粒径无明显变化，含量略有降低；加速(40℃)和长期(25℃)试验条件下6个月内，样品外观、粒径、含量均无明显变化，结果表明CA纳米混悬剂的稳定性较高。<br>　　 3.药物动力学实验表明，口服CA纳米混悬剂和上市参比制剂的C(max)分别为32.46ng/mL和26.94ng/mL，T(max)分别为1.44h和1.68h，AUC分别为290.72h*ng/mL和224.16h*ng/mL，与上市参比制剂相比，CA纳米混悬剂可提高口服吸收生物利用度，相对生物利用度为129.67％。<br>　　 结论：采用沉淀法与高压均质法联用技术制备的CA纳米混悬剂纳米粒粒径小，多分散指数较小，加水振摇片刻即分散均匀，物理和化学稳定性良好；体内试验结果表明CA纳米混悬剂生物利用度高于参比制剂；该技术制备工艺简单、载药量高，为其它难溶性药物的新制剂研究提供了试验依据。