检索历史 清除

摘要乳腺癌是威胁人类健康乃至生命的重要疾病。在中国,乳腺癌发病的年增长率比世界平均水平高出1％-2％,而我国对于乳腺癌的发病机制及治疗技术的研究仍然相对落后。肿瘤基因治疗一直是肿瘤的生物治疗方法,一般使用的病毒载体是腺病毒,通过对其改造成为增殖型腺病毒,并携带抗癌基因靶向在肿瘤细胞增殖及复制,表达抗癌相关基因并抑杀肿瘤,起到抗癌和溶瘤的双重效果,而对正常细胞影响较小。<br>　　 人纤溶酶原激活剂抑制剂2(PAI-2)是丝氨酸蛋白酶抑制物超家族成员,其在细胞的凋亡和分化、肿瘤的转移中都有重要的作用。因此本研究构建携带双基因人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)调控的腺病毒E1A基因和人纤溶酶原激活剂抑制剂2(PAI-2)基因的增殖型腺病毒载体。pAdSu-PAI-2,研究该增殖型腺病毒对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。首先采用同源重组的原理将载体pAdSu-PAI-2与腺病毒骨架质粒相作用,获得重组型腺病毒AdSu-PAI-2,Western结果显示该增殖型腺病毒能够在乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达,同时溶圈抑制实验证明重组PAI-2蛋白具有抑制尿激酶的生物活性。细胞划痕实验和Transwell迁移实验均证明该PAI-2基因具有抑制乳腺癌细胞迁移的作用。通过对MAPK信号通路的研究,发现该基因能够下调p38的磷酸化,而对ERK的磷酸化则没有影响。综上说明腺病毒介导表达的重组PAI-2蛋白具有抑制尿激酶的生物学活性,且能抑制乳腺癌细胞的迁移,并且能够通过抑制p38 MAPK信号通路的活性影响细胞的运动能力。<br>　　 尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统主要参与细胞外蛋白的溶解和组织修复,在肿瘤转移中也扮演着重要角色。因此本论文还研究了血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对乳腺癌细胞迁移及对uPA系统成员表达的影响,并扩增腺病毒Ad-NRAGE及Ad—RNAi,检测NRAGE基因对uPA系统成员表达的影响。Q-PCR结果显示在MDA-MB-231细胞中AngⅡ能够促进uPA和uPAR的表达,细胞划痕实验证明AngⅡ能促进细胞迁移。通过在细胞中感染病毒Ad-NRAGE或Ad—RNAi,半定量PCR实验表明在MDA-MB-231细胞中NRAGE基因可以抑制uPA和uPAR的表达。以上实验结果表明在MDA-MB-231细胞中AngⅡ能够促进uPA系统成员uPA和uPAR的表达,进而影响细胞的迁移。NRAGE能够抑制uPA和uPAR的表达,但这种影响是一个间接作用。<br>