抗蚜虫PPA基因的小麦转化-论文-万方医学网

抗蚜虫PPA基因的小麦转化

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摘要近年来植物转基因技术研究发展迅速，大豆和棉花等转基因作物已大面积推广应用，取得了巨大的经济与社会效益。小麦是世界主要的粮食作物，1992年第一株转基因小麦诞生，为开展小麦分子育种奠定了基础。本课题针对目前小麦转基因中存在的低转化率、栽培品种少、抗虫基因单一等问题，拟利用掌叶半夏凝集素(Pinelliapedatisecta agglutinin，PPA)基因转化小麦，建立较成熟的小麦栽培品种抗蚜虫基因的转化体系。<br>　　本文选用了“石4185”、“扬麦12”等7个小麦品种，研究了品种、激素等条件对小麦愈伤组织诱导及分化的影响，并通过检测GUS基因的瞬时表达情况，研究了基因枪介导法的主要参数对转化效率的影响。将含有抗蚜虫基因(PPA基因)和GUS报告基因的质粒载体导入小麦愈伤组织，在含潮霉素的选择培养基上进行筛选、分化及壮苗，获得了抗性植株。<br>　　实验结果表明，最适的转化受体是幼胚诱导的胚性愈伤组织，轰击前6小时及轰击后18小时将愈伤组织置于含甘露醇0.4 mol·L-1的高渗培养基上进行高渗处理有助于提高转化率，当轰击压力为1100 psi，质粒1μg/枪及金粉300μg/枪时，GUS瞬时表达率及表达量最高。将已轰击愈伤组织在含2 mg·L-1的2，4-D的恢复培养基上恢复培养5天至7天能有效提高愈伤组织的植株再生能力。用60 mg·L-1的潮霉素筛选30天后可以获得抗性愈伤组织，经过检测抗性愈伤组织中GUS基因稳定表达。在KT浓度为1 mg·L-1且NAA浓度为0.1 mg·L-1至0.5 mg·L-1的分化培养基中分化出绿色芽点，并诱导成苗。