EDNRB基因在黑色素细胞前体增殖过程中的作用机制研究-论文-万方医学网

EDNRB基因在黑色素细胞前体增殖过程中的作用机制研究

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摘要目的：本课题旨在探讨内皮素受体B(EndothelinreceptortypeB，EDNRB)介导的信号通路在小鼠黑色素细胞发育过程中的功能与作用机制。<br>　　方法：采用原代小鼠胚胎神经管外植法对神经嵴细胞进行体外培养，通过PKC激动剂(TPA)是否可以挽救Ednrb纯合子小鼠黑色素细胞的发育来确定PKC在黑色素细胞中的作用；利用RT-PCR和Western免疫印迹的方法，明确在黑色索细胞的发育过程中存在的PKC亚型；采用抑制PKC亚型功能和免疫荧光的方法确定哪种PKC亚型在黑色素细胞的增殖过程中发挥重要的作用。<br>　　结果：Ednrb纯合子小鼠的神经嵴细胞加入TPA培养12天后，出现黑色素细胞；在黑色素细胞前体的发育过程中存在9种PKC亚型；B6野生型小鼠E9.5天神经神经嵴细胞体外培养加入生长因子EDN3和PKCδ抑制剂时AKT的磷酸化水平发生了变化；免疫荧光计数和统计分析结果显示，与B6野生型小鼠E9.5天神经嵴细胞加入生长因子EDN3相对比，当B6野生型小鼠E9.5天的神经嵴细胞加入生长因子EDN3和PKCδ抑制剂时其黑色素细胞前体的增殖的数量明显减少，免疫荧光计数Ki67/MITF（即表达MITF的阳性细胞的增殖率）具有统计学意义。<br>　　结论：TPA可以挽救Ednrb缺陷的黑色索细胞前体的分化，并且能够促进其分化为成熟的黑色素细胞。在黑色素细胞发育的过程中，EDNRB信号通路可以通过激活PKCδ影响黑色索细胞前体的增殖。