摘要本文对荚果蕨贯众的化学成分及质量进行了研究。本研究分为五个部分:<br> 第一章:文献综述。对球子蕨科植物的化学成分及药理活性研究进展进行归纳总结。<br> 第二章:荚果蕨贯众的化学成分研究。荚果蕨贯众为荚果蕨属植物荚果蕨Malteuccia struthioptreis(L.)Todaro的干燥根茎及叶柄残基,从荚果蕨贯众乙醇提取浓缩液的沉淀和氯仿萃取部位分离得到8个单体。经波谱技术(包括1H-NMR,13C-NMR),鉴定了其中4个化合物的结构,分别为荚果蕨素、5,7,3’-三羟基-6,8-二甲基-4’-甲氧基二氢黄酮(首次从该植物中分离得到)、荚果蕨素-7-O-葡萄糖苷(首次从该植物中分离得到)和去甲氧基荚果蕨素。其余4个结构待定,初步推测2个为长链脂肪醇,一个为甾醇,另一个为长链脂肪醇和小芳香分子的混合物。<br> 第三章:荚果蕨贯众中总黄酮的含量测定方法研究。建立了荚果蕨中总黄酮的含量测定方法。采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法对荚果蕨中总黄酮含量进行测定,经方法学考察,以芦丁为对照品,以5%NaNO2溶液-10%硝酸铝溶液-5%氢氧化钠为显色剂,在494nm波长下测定,实验结果表明:对照品浓度在9~60μg/ml之间线性范围良好,回归方程为y=0.0122x+0.0034,r=0.9995;精密度、重复性、稳定性及加样回收率结果良好。根据样品测定结果可知,陕西西安、吉林长白山、内蒙古鄂尔多斯、河北安国荚果蕨贯众中总黄酮含量分别为19.756 mg/g、18.514mg/g、17.636 mg/g、18.834mg/g。<br> 第四章:HPLC法同时测定荚果蕨贯众中荚果蕨素、5,7,3'-三羟基-6,8-二甲基-4'-甲氧基二氢黄酮和去甲氧基荚果蕨素含量的方法研究。建立了荚果蕨贯众中荚果蕨素、5,7,3’-三羟基-6,8-二甲基-4’-甲氧基二氢黄酮和去甲氧基荚果蕨素的含量测定方法。其中荚果蕨素的线性范围为0.308~1.540μg,回归方程为y=2055.5x-17.174(r=0.99995);5,7,3’-三羟基-6,8-二甲基-4’-甲氧基二氢黄酮的线性范围为0.038~0.190μg,回归方程为y=5192.8x-2.2476(r=1.00000);去甲氧基荚果蕨素的线性范围为0.018~0.090μg,回归方程为y=3531.4x-0.281(r=1.00000)。加样回收率分别为98.13%、98.75%、97.38%,精密度,重复性,稳定性实验结果均符合要求。在方法学考察的基础上,对陕西西安,内蒙古鄂尔多斯、吉林长白山、河北安国4种不同产地荚果蕨贯众进行了含量测定,表明:荚果蕨素、5,7,3’-三羟基-6,8-二甲基-4’-甲氧基二氢黄酮在吉林长白山荚果蕨中的含量最高,分别为4.2256 mg/g和0.4538mg/g;河北安国中去甲氧基荚果蕨素的含量最高0.1857mg;陕西西安,内蒙古鄂尔多斯、吉林长白山、河北安国荚果蕨贯众中荚果蕨素、5,7,3’-三羟基-6,8-二甲基-4’-甲氧基二氢黄酮和去甲氧基荚果蕨素三个单体占总黄酮含量百分比(%)分别是24.36%、26.49%、26.27%、25.54%。<br> 第五章:荚果蕨贯众的指纹图谱研究。采用Zorbax SB-C18色谱柱(4.6×150mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱;流速:1mL/min;检测波长:210nm;柱温30℃;进样量2μL,建立了荚果蕨贯众的指纹图谱测定方法。在波长210nm下,归属了12个共有峰,其中9号峰为5,7,3’-三羟基-6,8-二甲基-4’-甲氧基二氢黄酮,11号峰为荚果蕨素,12号峰为去甲氧基荚果蕨素。精密度考察结果表明:各共有指纹峰相对保留时间RSD在0.041%~0.177%之间,相对峰面积RSD在0.594%~3.513%之间;重复性考察结果表明:各共有峰相对保留时间的RSD在0.026%~2.172%之间,相对峰面积的RSD在0.613%~2.773%之间;稳定性考察结果表明:供试品溶液在21h内测定稳定。方法学考察表明,本研究建立的分析方法有较好的精密度、重复性、稳定性。经中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004版)软件计算相似度,陕西西安,内蒙古鄂尔多斯、吉林长白山、河北安国4种不同产地荚果蕨贯众HPLC指纹图谱相似度很接近,相似度均大于0.95;对荚果蕨贯众(陕西西安),单芽狗脊蕨贯众(宁夏银川),乌毛蕨贯众(湖北武汉),粗茎鳞毛蕨贯众(天津),紫萁贯众(辽宁),苏铁蕨贯众(广西桂林),辽东鳞毛蕨贯众(福建福州)7种不同品种贯众进行了检测,相似度分别为0.517,0.746,0.580,0.746,0.796,0.606,0.838;因此本文建立的HPLC指纹图谱检测方法可用于鉴别荚果蕨贯众与其他品种贯众。<br> 本文通过查阅文献和对陕西西安荚果蕨贯众进行化学成分研究,发现其含有较多黄酮类化合物,因此在此基础上,研究了荚果蕨贯众中总黄酮含量测定的方法,并以自制的3种二氢黄酮类化合物单体为对照品,建立了HPLC法同时测定该3个化合物含量的方法,同时还建立了荚果蕨贯众HPLC指纹图谱检测的方法,为进一步研究荚果蕨贯众的质量标准和药理活性奠定了基础。
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