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摘要缺血性脑卒中是一种常见的脑血管疾病,具有高发病率、高致残率、高死亡率的特点,对人类危害极大。脑卒中后,中心缺血区由于急性脑梗死所致的血流中断,脑组织完全缺血缺氧,很快发生软化坏死,神经元功能丧失呈不可逆变化,难以恢复。在坏死灶的中心和正常组织间的移行区,存在一半暗带,为围绕在不可逆损伤之外的电生理活动消失,但尚能维持自身离子平衡的脑组织,有功能受损而无结构受损[1]。在脑缺血治疗策略中,基因或神经干细胞移植治疗挽救濒死的半暗带是近年脑缺血治疗学研究的重点。治疗的焦点是通过载体介导某种生长因子诱导缺血区血管发生对周围神经细胞起到营养作用[2]或者在中心区移植神经干细胞,诱导其分化为神经元,或(和)通过改善半暗带区血液动力学或改变特殊的分子、细胞学及生物学的机制,从而保护或抑制神经元的损伤。但是基因或神经干细胞治疗的作用机制研究目前尚不够深入,还有很多问题需要解决,特别是神经干细胞的移植过程中,移植物可通过不同的机制诱发宿主的免疫排斥,可能会影响到移植治疗的效果。<br>　　 本课题研究内容涉及逆转录病毒介导的血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、神经生长因子(nerve growthfactor,NGF)及VEGF与NGF联合应用对兔脑缺血模型的治疗作用及机理；此外,由于IL-10能抑制单核细胞和巨噬细胞的活性,能够在一定程度上抑制机体受到某些抗原刺激后而发生的免疫应答,因此,针对移植可能诱发的排斥反应,我们用jetPEITM线性的阳离子多聚物纳米材料将IL-10的基因导入神经干细胞使之表达并回植脑内,使移植的神经干细胞持续分泌IL-10,对其治疗效果及作用机理进行了初步研究。<br>　　 本课题分成2个部分:<br>　　 第一部分pSVK3病毒载体介导人VEGF/NGF基因治疗脑缺血的实验研究。本部分实验采用分子克隆技术,构建携带人VEGF、NGF基因的pSVK3病毒载体,用脂质体法转染包装细胞293细胞,制备具有感染活性的病毒粒子,移植入兔脑缺血模型,研究了VEGF、NGF及VEGF与NGF联合应用对兔脑缺血模型的治疗作用及机理。研究发现,pSVK3病毒介导的人VEGF、NGF移植后,Western Blot证实脑组织中有VEGF、NGF的表达,组织化学染色发现毛细血管密度增高,NSS评分均呈不同程度下降。VEGF、NGF联合使用要优于单用一种的治疗效果,同时可降低组织细胞的活性氧水平,维持细胞的线粒体膜电位。<br>　　 第二部分PEI介导的IL-10对神经干细胞移植治疗脑缺血的免疫耐受的实验研究。本实验探讨神经干细胞移植大鼠脑缺血模型后在大鼠脑缺血模型中的存活及分化能力；通过将jetPEITM介导pORF-hIL-10导入神经干细胞,观察神经干细胞移植后宿主的免疫反应。免疫组织化学染色研究发现神经干细胞可在大鼠脑缺血模型中可存活,并且可分化为神经元、星形胶质细胞,同时以移植点为中心向四周迁徙；jetPEITM介导的IL-10可降低神经干细胞移植后的免疫反应,利于干细胞移植后的存活。