检索历史 清除

摘要[目的]<br>　　 本实验研究CpG不同给药途径对哮喘小鼠肺泡灌洗液及外周血IFN-γ、IL-4细胞因子及气道组织病理改变的影响，同时检测NF-κB在肺组织内的表达情况，探讨CpG治疗哮喘的机制及其安全性。<br>　　 [方法]<br>　　 40只BALB/c小鼠随机分5组：A组为正常对照组，以PBS致敏激发；B组为哮喘组，以OVA致敏激发；C组为地塞米松组，OVA致敏激发并于激发前腹腔内注射地塞米松；D组为CpG腹腔注射组，OVA致敏激发并腹腔注射CpG；E组为CpG滴鼻组，OVA致敏激发并鼻腔滴入CpG。最后1次激发后24h内处死动物并收集标本。计数肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid，BALF)中的白细胞总数及嗜酸性粒细胞(Eosinophil，EOS)数；用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)检测BALF和血清中白细胞介素-4(Interleukin-4，IL-4)及干扰素-γ(Interferon gamma，IFN-γ)肺组织病理标本行苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosine，HE)染色观察小鼠肺组织病理形态学改变，用免疫组织化学(Immunohistochemistry，IH)法检测小鼠肺组织中NF-κB表达水平。所得数据均用统计学软件SPSS13.0进行统计分析。<br>　　 [结果]<br>　　 1小鼠反应性观察对照组小鼠无明显呼吸急促表现，行动活泼。哮喘组经OVA激发后出现呼吸急促，烦躁不安，连续激发三天后，皮毛粗糙，活动能力下降。地塞米松组及腹腔注射CpG组症状较哮喘组轻。CpG滴鼻组较哮喘组出现更加明显的呼吸短促，皮毛粗糙，活动能力严重下降，对刺激反应迟钝，进食量少等表现。<br>　　 2小鼠BALF中细胞学改变哮喘组BALF中白细胞总数及Eos计数均较正常对照组有明显增加(P<0.05)。经过地塞米松或CpG腹腔腹腔注射处理后，白细胞总数及Eos计数均较哮喘组减少(P<0.05)。CpG滴鼻组肺泡灌洗液出现大量红细胞渗出，使用嗜酸球细胞计数液处理后行Eos计数，计数结果比哮喘组明显降低(P<0.05)。<br>　　 3小鼠BALF中IL-4及INF-γ表达水平变化哮喘组BALF中炎症因子IL-4水平较正常组明显升高，INF-γ较正常组下降(P<0.05)。地塞米松治疗组BALF中IL-4较哮喘组有所下降(P<0.05)，INF-γ较哮喘组无明显改变(P>0.05)。CpG腹腔组和CpG滴鼻组IL-4均较哮喘组有明显下降(P<0.05)，INF-γ，较哮喘组及地塞米松组亦有升高(P<0.05)，其中CpG滴鼻组较腹腔注射组升高更加明显(P<0.05)。<br>　　 4小鼠血清中IL-4及INF-γ表达水平变化哮喘组血清中IL-4较正常组明显升高(P<0.05)，INF-γ较正常组明显降低(P<0.05)，地塞米松组IL-4较哮喘组明显降低(P<0.05)，INF-γ无明显改变。CpG腹腔注射组及CpG滴鼻组血清IL-4较哮喘组均有所降低(P<0.05)，INF-γ较哮喘组及地塞米松组均有升高(P<0.05)。CpG腹腔注射组与CpG滴鼻组相比较差别无统计学意义。<br>　　 5小鼠肺组织中的病理改变HE染色见正常对照组小鼠肺组织支气管壁及周围结构完整，未见或仅少许炎症细胞浸润，气道管腔内未见粘液栓塞等；哮喘组可见气管粘膜上皮细胞脱落，周围组织中大量炎症细胞浸润，以嗜酸性粒细胞为主，管腔内可见多量分泌物；地塞米松组及CpG腹腔注射组以上改变较为轻微；CpG滴鼻组肺组织未见明显嗜酸性粒细胞浸润，但有大量红细胞渗出。<br>　　 6小鼠肺组织NF-κB表达水平改变正常对照组小鼠肺组织中仅有少量NF-κB表达；哮喘组中NF-κB表达明显增加，在支气管纤毛上皮，各种炎症细胞均有表达，且以胞核内表达为主，呈棕黄色。地塞米松治疗组NF-κB表达较哮喘组明显减少，差别有统计学意义(P<0.05)。CpG腹腔注射组NF-κB表达较哮喘组无明显改变。CpG滴鼻治疗组NF-κB较哮喘组和CpG滴鼻治疗组有升高，且以胞内强阳性表达为主(P<0.05)。<br>　　 [结论]<br>　　 1、CpG不同给药途径均能逆转哮喘小鼠Th1/Th2失衡，缓解过气道嗜酸性粒细胞浸润。<br>　　 2、CpG可能通过局部刺激激活核因子NF-κB，诱导Th1型细胞因子表达，并通过Th1因子高表达拮抗Th2型因子的表达。<br>　　 3、不恰当的CpG刺激可能会导致Th1型应答过度，导致机体损伤。<br>