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摘要目的：<br>　　 观察柴胡皂苷-d(Saikosaponin-D,SS-D)对大鼠肝癌细胞H4-IIE细胞内钙离子浓度的影响,探讨SS-D诱导H4-IIE细胞内Ca2+和STIM1的调控机制。<br>　　 方法：<br>　　 阴性对照组为终浓度为50μM石胆酸(LCA)、阳性对照组为300μM熊脱氧胆酸(UDCA)加50μM LCA及处理组为终浓度为30μM、50μM、70μM、100μM的柴胡皂苷-D(SS-D)分别加50μM LCA,处理H4-IIE细胞12h后,噻唑蓝(MTT)比色观察SS-D对细胞的存活率来指导实验用药浓度,荧光指示剂Fluo-3/AM测定H4-IIE细胞内钙离子浓度,半定量RT-PCR检测STIM1 mRNA的表达水平。<br>　　 结果：<br>　　 (1)噻哗蓝(MTT)比色法检测终浓度分别为101μM、30μM、50μM、70μM、100μM、120μM SS-D处理H4-IIE细胞12h后,结果显示10μM、30μM、50μM、70μM、100μMSS-D对细胞的存活率都在90％以上,两两比较无差异(P＞0.05),而与对照组相比有差异(P＜0.05):120μM SS-D对细胞的存活率为88.88%,与对照组及10μM、30μM、50μM、70μM、1000μMSS-D处理组相较有意义(P＜0.05)。<br>　　 (2)荧光指示剂Fluo-3/AM结合流式细胞仪检测细胞内钙离子结果显示阴性对照组可引起胞质内钙离子浓度升高,其平均荧光强度(MFI)为35.76±1.37;阳性对照组可使其大幅度升高,其MFI值为74.74±1.26;不同浓度的SS-D也可使其不同程度升高,并且与SS-D呈浓度依赖性,其平均荧光强度(MFI)分别为59.95±1.02、73.89±1.35、80.30±0.04、93.30±0.83:阳性对照组及处理组的MFI值明显高于阴性对照组,两两相较差异显著(P＜0.05);50μM SS-D的MFI值与阳性对照组相当,两者相较无差异(P＞0.05);30μM SS-D处理组MFI值低于阳性对照组,两者相较有统计学意义(P＜0.05);70μM及100μM SS-D处理组MFI值都高于阳性对照组,两两比较有统计学意义(P＜0.05);尤其是100μM SS-D诱导Ca2+内流的效果最强;LCA及SS-D、UDCA都能诱导细胞钙库中钙离子释放。<br>　　 (3)SS-D及UDCA能增强H4-IIE细胞中基质相互作用因子1(STIM1)基因mRNA的表达,其基因mRNA的表达量明显高于空白组及阴性对照组,两两比较差异有意义(P＜0.05);30μMSS-D处理组基因表达量低于阳性对照组(P＜0.05);70μM及100μM SS-D处理组基因表达量高于阳性对照组(P＜0.05);50μMSS-D处理组基因表达量与阳性对照组相当(P＞0.05):LCA能抑制H4-IIE细胞中STIM1基因mRNA表达,其基因mRNA的表达量低于空白组(P＜0.05)。<br>　　 结论：<br>　　 1、浓度为10μM、30μM、50μM、70μM、100μM SS-D对细胞的生长无明显影响,说明以上浓度作用细胞12h是合适的。<br>　　 2、SS-D能诱导细胞钙库中钙离子释放及增加H4-IIE胞质内钙离子浓度([Ca2+]cyt),并且呈浓度依赖性;浓度为30μM SS-D处理组诱导Ca2+内流的作用不及阳性对照组,而50μM SS-D处理组对细胞内Ca2+影响与阳性对照组相当,并随着药物浓度的增大,作用逐渐增强。<br>　　 3、SS-D可能通过上调STIM1mRNA表达而激活钙池操作性钙通道(SOC),诱导Ca2+内流,增加[Ca2+]cyt,维持细胞内钙稳态,促进细胞的正常活动。<br>　　 4、本实验初步探讨了SS-D诱导大鼠肝癌细胞H4-II E Ca2+内流及调控机制,为临床治疗胆汁淤积性肝病提供思路。