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摘要第一部分人偏肺病毒在不同细胞的复制动力学<br>　　 目的：寻找出适合培养和分离hMPV的细胞。<br>　　 方法：采用hMPV A亚型标准株hMPV/NL/1/00和B亚型标准株hMPV/NL/1/99分别接种于Vero细胞、Vero-E6细胞、LLC-MK2细胞、A549细胞和Hep-2细胞,接种后逐日观察CPE,并于第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天从细胞中提取RNA并作逆转录,所获得的cDNA采用hMPV型特异性的探针及引物进行实时荧光定量PCR的检测。<br>　　 结果：接种病毒后3天可在Vero细胞、Vero-E6细胞、LLC-MK2细胞和A549细胞中观察到CPE,不同亚型的hMPV所致的CPE没有差别,但在Vero-E6细胞中CPE更易观察。hMPV可以在Vero细胞、Vero-E6细胞和LLC-MK2细胞中稳定有效地复制,不能在A549细胞和Hep-2细胞中稳定传代,两种亚型的hMPV病毒载量均在Vero细胞中达到最高。<br>　　 结论：vero细胞、LLC-MK2细胞和Vero-E6细胞均是适合培养和分离hMPV的细胞。A549细胞和Hep-2细胞不适合作为常规培养hMPV的细胞。<br>　　 第二部分用不同细胞从鼻咽分泌物中分离人偏肺病毒的研究<br>　　 目的：用临床标本进行实验,以评价第一部分获得的结果。<br>　　 方法：采用已经证实有hMPV感染的患儿的鼻咽分泌物标本(A、B亚型各两个)分别接种于Vero细胞、Vero-E6细胞、LLC-MK2细胞、A549细胞和Hep-2细胞,接种后逐日观察CPE,并于第2、4、6、8天从细胞中提取RNA并作RT,所获得的cDNA采用hMPV型特异性的探针及引物进行实时荧光定量PCR的检测。<br>　　 结果：(1)接种后在所有的细胞中都没有观察到CPE。(2)一个hMPV A亚型标本在接种后2天在Vero-E6细胞和Hep-2细胞中检测到,接种后8天在五种细胞中均检测不到;另一个hMPV A亚型标本在接种后2天五种细胞中都可以检测到,Vero-E6细胞中病毒拷贝数最高,接种后8天在3种细胞中仍可检测到,Vero-E6细胞中病毒拷贝数最高。(3)两个hMPV B亚型标本接种后2天可在五种细胞中检测到,在Hep-2细胞和LLC-MK2细胞中病毒拷贝数最高;接种后8天能在四种细胞中检测到,在LLC-MK2细胞和Vero细胞中病毒拷贝数最高。<br>　　 结论：Vero-E6细胞适合分离A亚型hMPV,LIC-MK2细胞适合分离B亚型hMPV。Hep-2细胞不适合用于分离hMPV。<br>　　 <br>