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摘要目的:胰腺癌的发病率占恶性肿瘤的1％-5%,死亡率在西方国家中占第4位,在世界范围占第5位,其发病率近年来呈明显上升趋势,全球每年胰腺癌的新发病例约为23万人。胰腺癌在临床上缺乏特异表现、预后差、易转移,手术切除率低于20%,且对放疗及化疗不敏感,其5年生存率低于5%,胰腺癌的预后在20年中并没有得到任何改善。目前胰腺癌的免疫治疗主要有特异性主动免疫治疗、单克隆抗体导向治疗、细胞因子治疗和过继性细胞免疫治疗。树突状细胞(DC)是目前发现的体内功能最强的专职抗原提呈细胞,在肿瘤细胞和T淋巴细胞的相互作用中起到桥梁和枢纽作用。细胞因子IFN-γ、IL-2和CD3单抗等诱导的杀伤细胞(CIK)是一种非MHC限制性的细胞毒性T淋巴细胞。CIK用于杀伤肿瘤被认为是肿瘤过继免疫治疗的首选方案。二者共同培养后,DCCIK细胞有望进一步提高抗肿瘤免疫治疗的范围和效果。K-ras基因12位的点突变在胰腺癌中高达75%-90%,被认为是胰腺癌基因免疫治疗的潜在位点。本实验通过观察经K-ras(12-Val)突变多肽负载的树突状细胞与CIK共培养以后对胰腺癌细胞(PANC-1)的杀伤作用,为胰腺癌的免疫治疗提供实验依据。<br>　　 方法:取健康人外周血液中的单个核细胞(peripheral blood mormouclearcells,PBMC)经过体外诱导分别扩增出DC和CIK,将二者共同培养后得到DC-CIK细胞,台盼蓝拒染法计数扩增细胞数,流式细胞仪测定DC、CIK以及DC-CIK的表型。ELISA法检测细胞上清液中IFN-γ、IL-12的水平。应用MTT法测定比较经K-RAS负载的DCCIK(K-ras-DCCIK组)、DCCIK(DCCIK组)、单纯的CIK(CIK组)在体外对胰腺癌细胞PANC-1的杀伤力。<br>　　 结果:在培养的第15天,K-ras-DCCIK的扩增倍数为21.2±3.1,是单纯CIK扩增倍数(16.1±2.7)的1.31倍(P＜0.05)。经过负载后的DC与CIK共同培养后得到的细胞群高表达CD3+CD56+、CD3+CD8+,并且细胞上清液中在体外杀伤试验中IFN-γ、IL-12的水平也显著高于其他两组(P＜0.05)。K-ras-DCCIK组在效靶比为5:1时对胰腺癌PANC-1细胞的杀伤率为(47.6±0.02)%、明显优于DCCIK组(40.1±0.03)%和CIK组(32.5±0.02)。且随着效靶比的增加,各组对胰腺癌PANC-1细胞的杀伤活性也增加。<br>　　 结论:K-ras负载后能促进DC的成熟,并且负载后的DC能增加CIK的扩增数量和CIK对胰腺癌细胞PANC-1的杀伤作用。