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摘要目的：构建加强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，pEGFP)联合小鼠干扰素-γ(mouse interferon-γ，mINF-γ)重组真核表达质粒pEGFP-mINF-γ，并转染入人卵巢癌细胞SKOV-3中，研究其转染后对SKOV-3细胞增殖的影响。<br>　　 方法：(1)提取小鼠脾淋巴细胞的总RNA，逆转录获得cDNA库；PCR扩增获得目的基因mIFN-γ的cDNA全长；将其装入pMD18-T载体；再将目的基因从pMD18-T载体亚克隆至pEGFP-C1载体的EcoRⅠ和BamHⅠ位点之间，从而构建成为重组质粒pEGFP-mIFN-γ并转化感受态细胞DH5α；经双酶切鉴定及核酸测序鉴定以确认该重组载体的正确性。(2)将重组质粒pEGFP-mIFN-γ以脂质体法，转染入人卵巢癌细胞SKOV-3，经G418筛选得稳定表达细胞株pEGFP-mIFN-γSKOV-3。用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)鉴定目的基因mRNA在转录水平的表达；用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定重组质粒转染组细胞上清液的mINF-γ分泌量及冻融液的mINF-γ总分泌量。(3)四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测比较重组质粒转染细胞、空质粒转染细胞和未转染细胞的体外增殖能力，Hoechst33258荧光染色法检测重组质粒转染细胞和空质粒转染细胞的细胞凋亡情况。<br>　　 结果：(1)重组质粒pEGFP-mIFN-γ经双酶切鉴定见目的条带，DNA测序与与登记的mIFN-γ cDNA序列完全一致。(2)RT-PCR结果经琼脂糖电泳分析可以见到重组质粒细胞出现代表mIFN-γ基因的条带，而空质粒转染组却没有相应的条带出现，证实此重组质粒已成功转染入到SKOV-3细胞，并出现mIFN-γ在转录水平的稳定表达；ELISA结果表明重组质粒转染组细胞培养液和细胞冻融液都有较高浓度的mIFN-γ被检出，而空质粒转染组和未转染组细胞的检测结果均为阴性，提示转入SKOV-3细胞内的目的基因已经能够正常表达。(3)MTT法检测重组质粒转染细胞在体外虽能继续增殖，但从接种后第2天开始吸光度值均明显低于空质粒转染细胞和未转染细胞细胞(P<0.05)，重组质粒转染组接种后第5天的细胞抑制率为30.78％，明显高于空载体转染组和未转染组(P<0.05)，证实重组质粒转染后对SKOV-3细胞的增殖具有明显的抑制作用；Hoechst33258荧光染色法细胞染色检测显示重组质粒转染组在荧光显微镜下可观察到不同程度的凋亡细胞，而空质粒转染组极少见到凋亡小体和凋亡细胞。<br>　　 结论：(1)成功构建了真核表达质粒pEGFP-mINF-γ。(2)成功将该质粒转染入人卵巢癌细胞SKOV-3，并获得mINF-γ的表达及分泌。(3)质粒pEGFP-mINF-γ的转染，明显抑制了人卵巢癌细胞SKOV-3的体外增殖，其细胞死亡的主要方式为调亡。