ADSCs修复早期退变腰椎间盘的实验研究-论文-万方医学网

ADSCs修复早期退变腰椎间盘的实验研究

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摘要目的：分离、扩增并鉴定兔脂肪间充质干细胞；建立兔椎间盘退变模型；无外源性生长因子及细胞支架的作用下，观察应用体外培养传代的同种异体脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)修复早期退变椎间盘的实验效果。方法：从成年兔颈后部脂肪组织取材，酶消化法分离、培养脂肪间充质干细胞，免疫荧光法检测细胞表面标志；纤维环穿刺抽吸髓核法建立兔腰椎间盘模型；将PBS(磷酸盐缓冲液)和ADSCs细胞悬液分别移植入退变的兔椎间盘中，在术后2周，4周，8周时行MRI检查后，处死实验动物，取材，行HE染色观察兔退变椎间盘内的修复情况，硫酸-咔唑法检测蛋白多糖含量变化情况。结果：分离和纯化的脂肪间充质干细胞体外扩增迅速，短时间内可以获得足够的种子细胞数量；免疫荧光检测ADSCs的表面抗原为CD29阳性，CD45阴性；纤维环穿刺抽吸髓核法可以成功的建立椎间盘退变的动物模型；2周时，MRI T2加权像信号强度，HE染色两项指标观察显示，ADSCs实验组和PBS对照组之间无明显差异，蛋白多糖生化指标改变P>0.05，无统计学意义。在4周，8周时PBS对照组MRI T2加权像信号下降程度，HE染色退变程度都明显高于ADSCs实验组，蛋白多糖生化指标改变P<0.05，有统计学意义。结论：1.胶原酶消化法可以成功分离获取脂肪间充质干细胞，并且可以获得充足的细胞数量；2.纤维环穿刺抽吸髓核法能够诱导椎间盘退变；3.经体外培养的同种异体脂肪间充质干细胞移植于诱导退变的椎间盘内，能够延缓椎间盘的退变。