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人类结直肠癌细胞系NCI-H716中高扩增基因的筛选及NDUFB9与MTSS1基因功能研究

摘要目的:基因扩增包括染色体基因拷贝数和结构的扩增,一般表现形式为双微体(DMs)和均质染色区(HSR)。双微体表现为染色体中环状,成对,染色较淡、无着丝粒,无端粒,可自主复制的额外染色体成分,携带扩增的基因,目前认为与肿瘤形成及浸润和侵袭肿瘤细胞耐药密切相关。<br>   因此,本实验的目的就是要沉默人结直肠腺癌细胞NCI-H716细胞系中双微体上的高扩增基因,进一步研究肿瘤相关基因MTSS1、NDUFB9基因在双微体形成及其在人结肠癌发生中的作用,从而得到人类结直肠癌的分子治疗的靶点。<br>   方法:使用SNP6.0芯片对人类结肠癌细胞系NCI-H716基因组DNA拷贝数进行分析,获得高扩增基因,并荧光原位杂交(FISH)检测这两个高扩增基因是否位于双微体上。并进一步对高扩增基因中的NDUFB9和MTSS1基因进行DNA水平、RNA水平的检测进一步对高扩增基因中的MTSS1基因和NDUFB9基因进行小干扰RNA实验,设计两组各4对干扰序列。随后将这些序列稳定转染入人类结直肠癌NCI-H716细胞,对上述转染后的细胞进行Western blot实验,进行蛋白定量检测。确定干扰效果后,对已转染入干扰序列的NCI-H716细胞进行细胞功能学实验如MTT,测定沉默NDUFB9和MTSS1后对NCI-H716细胞增殖能力影响。<br>   结果:通过SNP6.0芯片结果分析得到了来源于8号染色体的q24.12、q24.13、q24.21和10号染色体q26.13上的4个高扩增区。运用Real-time PCR对8q24.21高扩增区上的高扩增基因MTSS1基因NDUFB9基因进行DNA水平、RNA水平的检测,结果表明这两个基因扩增和表达水平均高于正常。FISH结果证实NDUFB9和MTSS1基因以双微体形式扩增。MTT实验结果表明NDUFB9与MTSS1基因表达沉默后NCI-H716细胞增殖能力下降。<br>   结论:NDUFB9和MTSS1基因在人类结肠癌细胞系NCI-H716中以双微体形式扩增,NDUFB9和MTSS1可以促进细胞增殖。

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