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摘要第一部分Ⅰ型神经纤维瘤病肿瘤组织成纤维细胞纯化培养和鉴定<br>　　 目的：探索和建立Ⅰ型神经纤维瘤病(NF1)肿瘤组织中成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的方法。<br>　　 方法：以NF1肿瘤组织为材料，采用组织块法分离培养成纤维细胞，细胞铺满培养瓶底后传代，通过差速贴壁法进行成纤维细胞的纯化，培养过程中倒置显微镜观察细胞形态学变化，并用波形蛋白、S-100染色等方法对培养细胞进行鉴定。<br>　　 结果：组织块法原代培养约5天可见类成纤维细胞从组织块周围游出，于3周左右细胞基本长满培养瓶底。传代时应用差速贴壁法进行成纤维细胞的纯化，第2、3代基本可获纯的含单个核的长梭形类成纤维细胞。免疫组化结果为波形蛋白染色阳性，S-100染色阴性。<br>　　 结论：组织块培养法可成功地进行NF1肿瘤组织中成纤维细胞的原代培养，在获得大量原代成纤维细胞的同时，较好地保持了其生物学特征，是一种较理想的NF1肿瘤组织成纤维细胞培养方法。<br>　　 第二部分Ⅰ型神经纤维瘤病成纤维细胞对共培养人成骨细胞碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响<br>　　 目的：研究Ⅰ型神经纤维瘤病(type1 neurofibromatosis，NF1)成纤维细胞(fibroblast，FB)对人成骨细胞系hFOB1.19成骨活性的影响。<br>　　 方法：研究对象N F1患者13例，对照组8例。术前均应用双能X线吸收测量仪(dual-energy x-ray absorptiometry，DEXA)测量骨密度(bone mineral density，BMD)，测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。采transwell将原代培养的NF1神经纤维瘤FB(5例)与hFOB1.19间接共培养(A组)，NF1棘上韧带FB(10例)与hFOB1.19间接共培养(B组)，以原代培养的对照组患者的棘上韧带FB(8例)与hFOB1.19间接共培养为正常对照(C组)。采用RT-PCR方法检测三组共培养hFOB1.19的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)和Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen，ColⅠ)的mRNA表达量，评价NF1神经纤维瘤及棘上韧带FB对hFOB1.19成骨活性的影响。<br>　　 结果：NF1患者腰椎(L2～L4)及股骨近端的BMD值明显低于正常对照组(P<0.05)。成功培养原代FB并与hFOB1.19间接共培养，但三组hFOB1.19的ALP和ColⅠ mRNA表达量无显著统计学差异(P>0.05)。<br>　　 结论：NF1患者FB对OB的影响可能与NF1骨骼异常缺乏显著关联。