换一批摘要进入20世纪以来,流感病毒在世界各地广泛流行,其传播范围、规模以及蔓延速度都达到了前所未有的程度,不仅严重影响着经济、社会的发展,而且对人民的健康与生命安全构成严重危害。流感病毒的高致病性和高变异性引起世界各地区人民的广泛关注,对抗流感药物的筛选也成为研究的重点。<br> A型流感病毒的非结构蛋白1(NS1),在调节流感病毒的致病性及毒力方面发挥着重要的作用。一方面,NS1蛋白通过抑制合成宿主蛋白、下调细胞凋亡以及阻止干扰素生成等,从宿主方面间接进行抗病毒反应;另一方面,NS1蛋白通过增强自身mRNA的翻译加快病毒的复制,直接增强流感病毒的致病力。NS1蛋白有两个结构域,分别是RNA结合区(RBD)和效应区(ED)。<br> 本课题主要通过分子克隆技术,将流感病毒Influenza virus A/Porto Rico/8/34(H1N1)亚型的NS1的RBD、NS1-S42E全长基因序列分别克隆到pET-32a和pET-28a原核表达载体上;通过原核—大肠杆菌表达系统得到大量的可溶蛋白,采用亲和层析、分子筛等手段纯化得到目的蛋白;接着运用悬滴气相扩散法筛选蛋白晶体;对蛋白晶体进行X射线衍射;最后收集数据,解析结构。<br> 最终,我们得到了分辨率分别为1.66(A)的NS1-RBD和2.98(A)的NS1-S42E蛋白结构,结构的测定为基于NS1抗流感药物的筛选打下了基础,同时为NS1分子机制的阐明提供了结构基础。
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