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摘要细胞色素b6f蛋白复合体(Cytochromeb6fcomplex,简称Cytb6f)是光合作用原初光能转换过程四种主要膜蛋白超分子复合体之一。它介导着光反应中心PSⅠ和PSⅡ之间的线性电子传递和围绕PSⅠ的循环电子传递。其主要的生理功能是催化电子传递和质子跨膜转移,形成跨膜质子电化学梯度,为ATP的合成提供能量,在光合作用光能转化过程中占有很重要的地位。细菌和莱茵衣藻Cytb6f的晶体结构已于2003年底获得了近原子水平的解析,但高等植物的Cytb6f的晶体结构至今尚未获得。近年来,世界各地的实验室都在努力攻坚,以期尽早获得高等植物的Cytb6f的晶体结构,来进一步揭示Cytb6f蛋白复合体中Chla和β-Car分子的生理功能,这对于进一步阐明光合作用高效转能及其调控的分子机理具十分重要的意义。<br>　　 为了得到高等植物的Cytb6f的晶体结构,我们以菠菜作为出发材料,在原分离提取流程的基础上做了诸多改进。改进后的方法使我们首次从菠菜类囊体膜中分离纯化了结晶纯的Cytb6f制剂,并初步得到Cyt。B6f的蛋白质晶体。尽管目前所获得的Cytb6f的蛋白质晶体大小状态还不足以进行数据收集,但为今后的高等植物的Cytb6f蛋白质结晶的进一步优化和解析研究提供了有效的实验基础。<br>　　 主要改进如下:<br>　　 (1)增加溴化钠洗涤类囊体膜次数,彻底地去除了膜表面的杂蛋白;<br>　　 (2)简化两次硫铵分级沉淀制备过程为一次硫铵分级沉淀制备;<br>　　 (3)优化了抽提过程的几个关键细节;<br>　　 (4)优化了蔗糖梯度离心条件;<br>　　 (5)使用PEG4000沉淀浓缩的方法浓缩结晶用目的蛋白,使蛋白得到进一步纯化。