检索历史 清除

摘要目的：<br>　　 白细胞介素-13(Interleukine-13，IL-13)是一种Th2型多效能细胞因子。已证实IL-13是致纤维化的首要细胞因子，可以与IL-13受体alpha1(IL-13Rα1)结合从而产生促纤维化作用。此外，IL-13另一受体IL-13受体alpha2(IL-13Rα2)，其可竞争性抑制IL-13Rα1与IL-13的结合，从而导致IL-13的JAK/STAT信号转导通路中断，抑制其促纤维化的过程。<br>　　 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核细胞/吞噬细胞产生的、具有广泛生物学活性的细胞因子。TNF-α可通过抑制TGF-β1的表达从而抑制TGF-β1的促纤维化作用，进而达到抑制纤维化的目的。最近研究发现在肺、皮肤等组织的成纤维细胞中，TNF-α可与IL-4共同作用上调IL-13Rα2的表达，从而达到抑制IL-13致纤维化的信号转导通路。<br>　　 本实验主要研究TNF-α和IL-13对人肝星状细胞LX-2的IL-13受体表达的影响，以及对人肝星状细胞LX-2胶原蛋白合成的影响，为研究肝纤维化发生和发展机制奠定基础。<br>　　 方法：<br>　　 1.台盼蓝染色法检测LX-2细胞的活性。<br>　　 2.HE染色法观察LX-2细胞形态。<br>　　 3.RT-PCR检测不同时间、不同剂量IL-13、TNF-α刺激LX-2细胞对IL-13Rα1mRNA、IL-13Rα2mRNA和I型胶原蛋白(procollagen type I，PCOLI)mRNA表达的影响。<br>　　 4.RT-PCR检测不同组别PCOLI mRNA的表达，实验分四组：空白对照组、IL-13组、TNF-α组及IL-13+TNF-α组。<br>　　 5.羟脯氨酸实验定量检测总胶原蛋白的含量。<br>　　 结果：<br>　　 1.LX-2细胞的活性良好，IL-13和TNF-α对细胞都无毒性作用。<br>　　 2.HE染色法镜下观察LX-2细胞呈星状，胞核呈椭圆形。<br>　　 3.RT-PCR检测结果显示，TNF-α、IL-13刺激LX-2细胞对IL-13Rα1mRNA的表达没有影响；LX-2细胞IL-13Rα2表达缺失。<br>　　 4.RT-PCR检测结果显示，TNF-α刺激LX-2细胞后PCOLI mRNA表达下调，与剂量呈负相关；IL-13刺激LX-2细胞后PCOLI mRNA表达有不同程度上调，其中50ng/ml组最为显著。<br>　　 5.羟脯氨酸实验检测结果显示：对照组为6.58μg/mgprotein；TNF-α组胶原蛋白含量随TNF-α剂量增加而逐渐减少；胶原蛋白含量IL-135ng/ml组和10ng/ml组与对照组相当，而IL-1320ng/ml组和50ng/ml组高于对照组，其中50ng/ml组最为显著，且二者差异有统计学意义。<br>　　 结论：<br>　　 1.IL-13、TNF-α对LX-2细胞IL-13Rα1 mRNA的表达无影响。<br>　　 2.TNF-α下调LX-2细胞PCOLI mRNA的表达，与剂量呈负相关性。<br>　　 3.IL-13上调LX-2细胞PCOLI mRNA的表达。<br>　　 4.IL-13Rα2在LX-2细胞中表达缺失。