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摘要目的：<br>　　 探讨烟酰胺核糖核酸转移酶(NAMPT)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)初诊时的表达情况,及其在儿童ALL中的预后价值。<br>　　 方法：<br>　　 以定量RT-PCR方法,以GUS(β-葡萄糖醛酸酶)为内参基因,检测儿童ALL初诊组(160例)NAMPT的表达水平,以11例ALL患儿在长期持续完全缓解(CCR)≥5年时的骨髓样本为对照组,分析其与临床分型、微小残留病(MinimalResidualDisease,MRD)及预后的相关性。<br>　　 结果：<br>　　 在儿童ALL初诊时,NAMPT的表达水平低于CCR组(P＜0.01);NAMPT的表达水平与外周血白细胞计数明显相关(Spearman相关系数-0.217,P=0.006),白细胞水平＜50×109/L的患儿的NAMPT表达水平明显高于≥50×109/L者(P=0.008);初诊时NAMPT的表达水平与其他临床特征无明显相关性;在BCR-ABL+患儿中,初诊时NAMPT表达水平与诱导缓解治疗结束时(第33天)的MRD呈负相关(n=14,相关系数为-0.635,P值为0.015),而在TEL-AML1+患儿中则与MRD呈正相关(n=46,相关系数为0.348,P值为0.028);以病例组NAMPT表达水平的中位数(5.3068)为标准,将患儿分为低表达与高表达两组,TEL-AML1+患儿中,NAMPT表达水平低组第33天MRD水平较低(P=0.043);未发现NAMPT表达水平与其他亚型的MRD存在相关性;所有复发病例初诊时NAMPT表达水平均低于CCR组平均水平,但初诊时NAMPT表达水平与复发与否、复发部位无明显相关性。<br>　　 结论：<br>　　 1.初诊ALL患儿NAMPT的表达水平低于CCR组患儿,复发患儿初诊时NAMPT表达水平也低于CCR组。<br>　　 2.初诊时外周血白细胞数与NAMPT表达水平呈负相关。<br>　　 3.NAMPT可能对BCR-ABL+、TEL-AMLI+LL的早期治疗反应产生不同影响。<br>　　 4.初诊时NAMPT表达水平可能与患儿预后无关。<br>　　 第二部分<br>　　 目的：<br>　　 探讨抑制NAMPT表达是否影响白血病细胞对化疗药的敏感性,初步探讨其相关机制。<br>　　 方法：<br>　　 在体外合成针对NAMPT基因的小干扰RNA(siRNA),转染K562细胞株。将转染后的K562细胞经1μM伊马替尼作用48小时后,采用PI/Calcein染色方法测定细胞存活率;或经不同浓度伊马替尼作用48小时后,采用MTS法测定细胞增殖活性,计算半数抑制浓度(IC50)。未经转染的K562细胞经1μM伊马替尼作用3～48小时后,采用WesternBlot方法检测NAMPT表达的变化。通过对NCBIGEO中基因表达数据的挖掘分析及WesternBlot方法,探讨NAMPT-siRNA和伊马替尼对凋亡相关基因表达的影响。采用荧光素酶报告基因技术,研究NAMPT-siRNA、伊马替尼对NF-κB转录活性的影响。<br>　　 结果：<br>　　 对于NAMPT-siRNA干扰组、对照组及空白组,1μM伊马替尼分别作用48小时后,细胞存活率分别为(6.75±1.44)％、(22.25±1.03)％、(33.25±1.65)％,差异具有统计学意义(P＜0.05),NAMPT-siRNA干扰组细胞存活率明显低于阴性对照组,提示抑制NAMPT表达能增强K562细胞对伊马替尼的敏感性;不同浓度伊马替尼分别作用于上述三组细胞48小时后,IC50值分别为(0.063±0.004)μM、(0.223±0.016)μM、(0.311±0.052)μM,差异具有统计学意义(P＜0.05),对增殖曲线拟合结果显示,NAMPT-siRNA干扰组较对照组在0.01μM-0.1μM药物剂量范围内斜率增大;1μM伊马替尼作用于K562细胞3h、6h、12h、24h、48h后,NAMPT表达无明显变化,提示伊马替尼可能并未直接调节NAMPT来影响细胞存活;通过表达谱芯片分析及WesternBlot方法验证,发现NAMPT-siRNA和伊马替尼处理均可下调NF-κB下游因子——抗凋亡基因Bcl-2表达水平,两者同时作用时效果更明显;用含NF-κB结合位点的启动子驱动的荧光素酶报告基因分析发现,NAMPT-siRNAT及伊马替尼均能使降低NF-κB转录活性,两者同时作用时尤为显著。<br>　　 结论：<br>　　 伊马替尼可能并非通过调节NAMPT表达影响细胞存活,但抑制NAMPT表达能增强K562细胞对伊马替尼的敏感性,这能与抑制NF-κB及其下游因子Bcl-2有关。