检索历史 清除

摘要通过体外筛选的方法，已经得到具有不同催化活性的和具有新颖结构的DNA酶。通过体外筛选的方法得到的DNA酶可以催化不同反应包括:DNA连接，RNA连接和分解，DNA磷酸化作用，DNA腺苷酰化作用，DNA剪切，DNA水解反应等。由于DNA的半衰期很长，化学性质稳定，所以对剪切DNA单链的DNA酶报道很少。我们通过体外筛选的方法得到了三类剪切DNA的DNA酶，并对其性质和结构做了详细研究。<br>　　 本学位论文由七部分组成。<br>　　 第一部分：介绍了DNA酶的研究进展，介绍了几种主要的DNA酶及得到它们的方法。<br>　　 第二部分：首先介绍了运用体外筛选的方法得到了三类剪切DNA的DNA酶，分别为A-2、A-3、F-8。<br>　　 第三部分：介绍了A-2DNA酶的结构性质的研究，通过研究发现A-2对DNA单链剪切需要Cu2+、Mn2+离子的存在，剪切速率为0.21h-1。A-2剪切识别位点为NNCTGN↓G(N=A/T/G/C)。<br>　　 第四部分：介绍了A-3DNA酶的结构性质的研究，通过研究发现A-3对DNA单链的剪切需要Cu2+、Mn2+的存在，对Mn2+的依赖性比Cu2+强。A-3的剪切识别位点为THYTGN上G(H=T/C/A，Y=T/C)。<br>　　 第五部分：介绍了F-8DNA酶的结构特性的研究，通过研究发现F-8同时需要Cu2+、Mn2+做为辅助因子对DNA单链剪切。F-8的剪切识别位点为N↓TGC。其中F-8催化中心上的发卡结构可以通过不同的目的对其进行修饰。<br>　　 第六部分：介绍了三类DNA酶的剪切机理，通过凝胶、化学试剂、质谱等方法确定，A-2、A-3具有相同的剪切位点，剪切机理相同均为去氧化反应。F-8通过水解作用剪切底物，得到3'磷酸根，5'羟基的产物。加入H2O2三类DNA酶的催化效率都大大提高。<br>　　 第七部分：介绍了在F-8结构与反应条件详细研究的情况下，通过对F-8进行修饰作为探针等工具。