摘要目的:筛选人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染人神经胶质瘤细胞差异表达的miRNA,为进一步研究HCMV的致畸机制提供基础。<br> 方法:用HCMV(MOI=5)感染人神经胶质瘤U251细胞株,感染后24h,48h,72h收获细胞作为为实验组,以模拟感染的正常细胞为对照组。用miRNA表达谱芯片技术检测细胞的miRNA表达水平,应用软件筛选并获得一些差异表达明显的miRNA,再利用Taqman探针或SYBR绿色荧光染料Ⅰ(SYBRGREENⅠ)实时定量PCR验证芯片结果,应用生物信息学软件预测miRNA的靶基因,并筛选出与神经系统发育有关的靶基因。<br> 结果:与模拟感染的细胞相比,24h.p.i,48h.p.i,72h.p.i实验组中有33个细胞miRNA表达显著差异,其中19个表达上调均超过2倍,有hsa-miR-1275, hsa-miR-296-3p, hsa-miR-1246, hsa-miR-409-3p等;14个表达下调超过2倍,有hsa-miR-634,hsa-miR-129-3p,hsa-miR-340*,hsa-miR-769-5p等。实时定量PCR验证结果显示:与芯片结果基本一致,hsa-miR-381,hsa-miR-622,hsa-miR-27b,hsa-miR-296-3p表达上调,hsa-miR-634表达显著下调,可初步作为其特异基因。生物信息学结果表明:hsa-miR-381与神经系统发育相关的靶基因有10个,如ROM1、SIAH1、JAK2等;hsa-miR-622的靶基因有4个,分别是BTK、PHOX2B、AQP8和PAX; hsa-miR-27b的靶基因有40个,如SYT-1、HOXB8、OTX2等;hsa-miR-296-3p的靶基因有7个,如GPR143、NOG、HOXB6等;hsa-miR-634的靶基因有4个,分别是NOTCH3、TYR、ACVR1和CELSR3;其他差异表达miRNA的靶基因还有NEROD1、AQP4、NRP2、SOX2等。<br> 结论:HCMV感染人神经胶质瘤细胞可诱导部分细胞miRNA表达改变。Hsa-miR-381,hsa-miR-622,hsa-miR-27b,hsa-miR-296-3p表达上调,hsa-miR-634表达显著下调。
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