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摘要目的：以hCLP46和内质网分子伴侣Calnexin之间的相互作用为例，研究影响蛋白质弱相互作用的因素，并验证二者之间的相互作用，初步探索hCLP46与Calnexin相互作用对Notch信号通路的功能影响。<br>　　方法：采用免疫共沉淀方法验证hCLP46与分子伴侣Calnexin之间较弱的相互作用，并优化和筛选免疫共沉淀技术的影响因素。采用化学合成法合成含有63nt靶向抑制Calnexin的寡核苷酸序列，构建pSUPER-Calnexin-siRNA重组载体。采用RNAinterference抑制Calnexin，采用RT-PCR检测hCLP46的表达。抑制Calnexin后，WesternBlot法检测Notch活化信号NICD的表达。抑制hCLP46后，WesternBlot法检测Calnexin的表达。<br>　　结果：通过优化和筛选免疫共沉淀技术的影响因素，确立了影响免疫共沉淀技术的实验因素包括细胞裂解液各组分浓度、抗体用量、hCLP46蛋白量和交联剂DSP的稳定作用。hCLP46和Calnexin相互作用的最佳条件分别是：裂解液10mMTris-HCl的pH值为7.4，洗脱液的pH值为6.8；NaCl的适宜浓度为100mM；Myc抗体用量为每100μL裂解物加0.48μg抗体；hCLP46的表达量需与Calnexin的蛋白量相当；另需1mM交联剂DSP稳定二者的相互作用。采用最佳条件验证了二者的相互作用。成功构建了pSUPER-Calnexin-siRNA重组载体，且有效抑制了Calnexin在mRNA水平和蛋白水平的表达。抑制Calnexin后，hCLP46在mRNA水平升高，NICD表达降低。抑制hCLP46后，Calnexin的表达未变化。<br>　　结论：hCLP46和Calnexin的相互作用需温和的细胞裂解液浓度、中性的环境、二者蛋白的表达量保持相当、适量的孵育抗体及交联剂DSP的稳定作用。Calnexin和hCLP46的相互作用可能在hCLP46正常糖基化修饰Notch受体中起到关键性的作用。因此，二者的相互作用为进一步研究hCLP46在Notch信号通路中作用提供了一定的理论支撑和科学依据。