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摘要第一部分非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化<br>　　[目的]观察非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例以及TGF-β和IFN-γ水平的变化情况，探讨非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞变化的相关因素。<br>　　[方法]选择30例于2008年5月～9月入住复旦大学附属中山医院的初诊、初治的肺癌患者，手术切除标本均经病理证实为非小细胞肺癌。健康志愿者30例。分离其外周血单个核细胞(PBMC)，用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞比例，Real-time PCR检测Foxp3基因的表达，ELISA法检测TGF-β及IFN-γ水平。<br>　　[结果]非小细胞肺癌患者PBMC中CD4+CD25+调节性T细胞占总CD4+T细胞比例为42.14±14.32％、Foxp3基因的相对表达量为0.96±0.44、TGF-β水平为67.24±8.79 pg/ml，均高于健康志愿者(CD4+CD25+调节性T细胞比例为8.42±2.69％、Foxp3基因的相对表达量为0.66±0.09、TGF-β水平为33.58±4.74 pg/ml)，差异具有显著的统计学意义(P<0.05)，但非小细胞肺癌患者上述指标在不同病理分型、临床分期、病理分级的亚组内比较无显著性差异。非小细胞肺癌患者和健康志愿者外周血中的IFN-γ水平分别为30.40±9.52 pg/ml和33.33±20.02pg/ml，两者比较无显著性差异(P>0.05)。非小细胞肺癌患者外周血中TGF-β水平与CD4+CD25+调节性T细胞比例呈直线相关性(偏回归系数=0.598，P=0.046)。<br>　　[结论]非小细胞肺癌患者外周血中存在CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比例及TGF-β水平升高的现象，与病理分型、临床分期、病理分级无关。外周血中TGF-β水平与CD4+CD25+调节性T细胞比例呈直线相关性。<br>　　第二部分非小细胞肺癌患者肿瘤微环境及转移/未转移淋巴结中Foxp3基因的表达<br>　　[目的]观察非小细胞肺癌患者肿瘤微环境及转移/未转移淋巴结中Foxp3基因的表达情况。<br>　　[方法]入组的非小细胞肺癌患者同第一部分。取术后肺癌组织及淋巴结石蜡切片，应用免疫组织化学方法观察非小细胞肺癌患者肿瘤组织内、肿瘤组织与正常肺组织交界处(简称交界处)及转移/未转移淋巴结中淋巴细胞表达Foxp3的阳性程度。应用ELISA法检测肺癌组织匀浆中TGF-β及IFN-γ水平。<br>　　[结果]非小细胞肺癌患者肿瘤组织和交界处淋巴细胞表达阳性Foxp3的OD值分别为14.06±4.14和13.29±3.81，两者比较无显著性差异(P>0.05)；在不同病理类型亚组中，腺鳞癌在肿瘤组织及交界处表达Foxp3的阳性程度均强于鳞癌(20.50 vs12.33±2.59；19.90 vs11.52±2.25，P<0.05)，但鳞癌与腺癌或腺癌与腺鳞癌之间的比较无显著性差异(P>0.05)；在不同临床分期亚组中，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期在肿瘤组织表达Foxp3的OD值分别为15.22±3.07、16.58±2.95、18.17±1.82，均明显高于Ⅰ期(9.35±0.81，P<0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期在交界处表达阳性Foxp3的OD值分别为13.98±3.61、15.48±2.73、17.33±1.99，也均明显高于Ⅰ期(9.25±0.71，P<0.05)，但Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三期的亚组内比较无显著性差异(P>0.05)。在不同病理分级亚组中，Ⅱ级、Ⅱ～Ⅲ级、Ⅲ级在肿瘤组织或交界处表达Foxp3的阳性程度比较均无显著性差异(P>0.05)。转移淋巴结中淋巴细胞表达Foxp3的阳性程度要明显强于未转移淋巴结(16.28±3.31 vs8.62±0.74，P<0.05)。除腺麟癌转移淋巴结表达Foxp3的阳性程度明显强于鳞癌外(19.60 vs11.88±0.85，P<0.05)，其他不同病理类型、不同临床分期、不同病理分级亚组在转移或未转移淋巴结中表达Foxp3阳性程度的组内比较均不具有显著性差异(P>0.05)。非小细胞肺癌患者肿瘤组织匀浆中TGF-β及IFN-γ水平在不同病理分型、临床分期、病理分级亚组内的比较均无显著性差异(P>0.05)。<br>　　[结论]非小细胞肺癌患者转移淋巴结中淋巴细胞表达Foxp3的阳性程度明显高于未转移淋巴结，且中晚期患者肿瘤微环境中淋巴细胞表达Foxp3的阳性程度高于早期患者。<br>　　第三部分 CpG ODN对非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的影响<br>　　[目的]探讨CpG ODN对非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞、Foxp3基因的表达及TGF-β、IFN-γ的干预作用。<br>　　[方法]入组的非小细胞肺癌患者同第一部分。将非小细胞肺癌患者的PBMC随机分为实验组和安慰剂组，每组各15例。分别给予1μM的CpG ODN2006或安慰剂CpG ODN1612干预，比较干预前后两组外周血中CD4+CD25+调节性T细胞比例、Foxp3基因的表达及TGF-β、IFN-γ水平的变化情况。<br>　　[结果]CpG ODN干预后，CpG ODN2006实验组的CD4+CD25+调节性T细胞比例、Foxp3基因的相对表达量及TGF-β水平出现了下降(分别为44.16±11.61 vs36.52±10.78％：1.15±0.48 vs0.65±0.17；68.25±9.25 vs58.22±4.16)，差异均具有显著性(P<0.05)。CpG ODN1612安慰剂组的上述指标在干预前后则无显著性改变(40.11±16.76 vs40.92±16.93％；0.77±0.33 vs0.78±0.21：65.84±9.13vs58.96±4.73，P>0.05)。两组的IFN-γ水平在干预前后的变化均无显著性差异。<br>　　[结论]CpG ODN2006可下调非小细胞肺癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞比例及TGF-β水平，但对IFN-γ分泌的影响不明显。