检索历史 清除

摘要目的：研究转染增殖细胞核抗原(PCNA)肽表位融合白介素18(IL-18)基因的树突状细胞(DCs)刺激T淋巴细胞后对结肠癌细胞凋亡的影响。<br>　　方法：采用密度梯度离心法分离获取人外周血单个核细胞(PBMC)，分离培养人树突状细胞(Dendritic cells，DCs)和T淋巴细胞，运用流式细胞仪测定未成熟DC的CD40及成熟DC的CD83。通过非脂质体聚合物MegaTran1.0分别将带有荧光标记的空质粒(pIRES-EGFP)，PCNA肽表位质粒(pIRES-EGFP-PCNA(6))和PCNA肽表位融合IL-18基因质粒(pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18)转染到DCs内。通过荧光情况鉴定转染效率。根据本课题既往试验结果，三组按照DCs：T淋巴细胞1:10的比例与T淋巴细胞共同培养，并设置空白对照组。选用T淋巴细胞与结肠癌细胞浓度比为5:1，10:1，20:1，40:1四个浓度梯度，取共培养后的上清液与结肠癌细胞共培养。采用流式细胞仪测定结肠癌细胞的凋亡。<br>　　结果：人PBMC可以成功诱导出DC，流式细胞仪显示人DC高表达CD40(72％)，成熟DC较高表达CD83(75％)。MegaTran1.0能较好的将质粒转染至未成熟的DCs内。各组DCs刺激T淋巴细胞后均能诱导结肠癌SW620细胞的凋亡。在相同T淋巴细胞与结肠癌SW620细胞的浓度比下，转染pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18的DCs刺激T细胞后的上清液对结肠癌细胞SW620的凋亡最明显。优于对照组、空载体组和pIRES-EGFP-PCNA(6)组。PCNA肽表位基因转染组与空白对照DCs组、空质粒组比较差异均有统计学意义(P<0.01)，空白对照组与空质粒组比较无统计学意义(P>0.05)。且各组内，随着浓度比的增加，结肠癌SW620细胞凋亡越明显。<br>　　结论：转染pIRES-EGFP-PcNA(6)/IL-18的DCs刺激T淋巴细胞后的上清液对结肠癌SW620细胞的凋亡作用最强。T淋巴细胞与结肠癌细胞效靶比浓度越高，凋亡效果越好。在本实验浓度范围内有浓度依赖性。