换一批
换一批摘要吡咯赖氨酸是自然界中编码的第22个氨基酸。在一种被称为甲烷八叠球菌的古细菌中，它通过琥珀密码子UAG被合成进参与甲胺代谢途径的三个蛋白。UAG编码吡咯赖氨酸的过程需要pylT基因（产生tRNAPyl）和pylS基因（编码吡咯赖氨酰-tRNA合成酶）。pylB、pylC和pylD基因是吡咯赖氨酸合成所必须的，该过程是非tRNA依赖的。S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)蛋白PylB介导了赖氨酸变位酶反应，使L-赖氨酸经催化产生了3-甲基鸟氨酸，之后3-甲基鸟氨酸与另一分子的L-赖氨酸在PylC的作用下连接在一起，随后被PylD氧化，产物脱水成环最终形成L-吡咯赖氨酸。我们在大肠杆菌中克隆并表达了Methanosarcinamazei中的pylB、pylC和pylD基因。通过使用若干种载体，表达纯化了带有不同tag的这三个蛋白。为了得到状态均一的蛋白样品，我们还尝试了不同方法。<br> Leptosphaeriarhodopsin是一个微生物视紫质家族成员，该家族是一类含有七次跨膜螺旋的膜蛋白，与G蛋白偶联受体类似。微生物视紫质是光敏的，有一个全反式视黄醛生色基团，该基团通过希夫碱与赖氨酸侧链共价相连。我们把这个基因克隆在了pPICZ(α)A载体中，并把它转入了甲醇营养酵母（毕赤酵母）。我们对该膜蛋白的表达、纯化和结晶进行了研究，并尝试了不同的去垢剂。目前我们已经得到了衍射达到7埃的晶体。
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