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摘要TBX1(GeneID:6899)基因属于T-box转录因子家族，后者在种系发生和进化中趋于保守，其成员均包含一个相同的DNA结合域即T-box，因而得名。1997年，Chieffo等首次克隆了人的TBX1基因，并将其定位于染色体22q11.21。研究者近期发现，TBX1基因可能影响包括耳、心脏、甲状旁腺、胸腺、牙齿等多种组织和器官的发育，并在精神疾病的发病中扮演一定的角色。<br>　　 多项研究提示泌尿生殖系统发育缺陷与染色体22q11.2微缺失密切相关，具体的畸形可涉及肾脏、输尿管/膀胱以及尿道等，总体发病率高达36％。TBX1是22q11.2缺失关键区内的关键基因。围绕该基因的研究提示，TBX1可能通过剂量依赖形式影响SHH、FGF、WNT以及BMP等相关信号通路，进而调控包括肾脏、心脏、耳、胸腺、甲状旁腺在内的多种器官的发育。动物实验亦证实，Tbx1基因缺失或单倍剂量不足可导致类似于人类22q11.2微缺失综合征的表型。<br>　　 目前围绕TBX1基因的研究主要集中于其与心脏畸形的关系，而该基因是否与泌尿生殖系统畸形的发生存在联系尚未见报道。本课题组前期研究发现，Tbx1和Hoxd10仅在小鼠胚肾发育的某些特定阶段高表达，提示二者参与肾脏发育调控。此外，在小鼠肾脏组织中，Tbx1和Hoxd10之间存在相互影响。<br>　　 由于人类与小鼠在基因组上存在高度同源性，本研究拟运用RNA干扰技术抑制人胚肾细胞中TBX1和HOXD10基因的表达，通过观察二者以及下游基因的表达情况进一步揭示参与肾脏发育调控的相关分子网络。<br>　　 材料与方法:<br>　　 一、实验材料<br>　　 1、人胚肾细胞系HEK293<br>　　 2、Western Blot相关试剂<br>　　 3、RT-PCR实验相关试剂<br>　　 4、Real-time PCR实验相关试剂<br>　　 5、细胞培养及转染相关试剂<br>　　 二、实验方法<br>　　 1、HEK293细胞培养，RNA干扰TBX1及HOXD10基因，检测干扰效果。<br>　　 2、通过Western Blot及Real-time PCR，分别在mRNA和蛋白质水平检测RNA干扰后HEK293细胞中TBX1及HOXD10的表达情况。<br>　　 3、应用Real-time PCR技术验证SMAD1与TBX1，HOXD10之间的调控关系。<br>　　 实验结果:<br>　　 1、分别针对TBX1和HOXD10基因所合成的三段siRNA对HEK293细胞中二者的表达均产生下调作用，其中沉默效果最为明显者包括TBX1-588-siRNA和HOXD10-406-siRNA。<br>　　 2、在HEK293/TBX1-588-siRNA和HEK293/HOXD10-406-siRNA细胞中，TBX1和HOXD10基因在mRNA和蛋白质水平均存在表达下调，但程度有所差异。<br>　　 3、在HEK293/TBX1-588-siRNA和HEK293/HOXD10-406-siRNA细胞中SMAD1基因表达升高，但上调程度有所差异。<br>　　 结论:<br>　　 1、在HEK293细胞中，TBX1与HOXD10基因之间存在正性调控作用。<br>　　 2、在HEK293细胞中，TBX1可负向调控SMAD1基因的表达，进而影响TGFβ-BMP通路。