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摘要目的:<br>　　 观察温和灸肾俞穴延缓衰老效应和对D-半乳糖衰老大鼠海马、肝脏、肾脏组织中P16、PCNA蛋白表达的影响，以阐释灸法延缓衰老的作用机理及其对衰老机体多种组织器官的保护机制，为温和灸肾俞穴延缓衰老的临床运用提供科学证据。<br>　　 方法:<br>　　 将32只大鼠随机分为正常组、模型组、维生素E组、温和灸组。应用5％D-半乳糖溶液500mg/kg/d腹腔注射6周的方法，制备衰老大鼠模型。维生素E组在造模的同时采用0.4％VE溶液25mg/kg/d灌胃，温和灸组在模型制备开始时采用温和灸肾俞穴（左右穴位交替使用）5min/d，连续6周，进行治疗。采用大鼠Morris水迷宫试验观察大鼠空间学习记忆能力;采用流式细胞术检测大鼠外周血细胞的凋亡;采用免疫组织化学方法检测大鼠海马、肝、肾组织中p16与PCNA蛋白的表达。<br>　　 结果:<br>　　 1、在实验过程中，正常组大鼠皮色光泽，精神饱满，活动敏捷。模型组大鼠皮毛卷曲，枯黄，光泽欠佳，精神不振，易激惹，同时出现活动减少，行动迟缓。维生素E组及温和灸组大鼠皮毛光泽、精神状态、日常活动均有不同程度改善。治疗结束时各组大鼠体重虽有差异，但无统计学意义（P＞0.05）。<br>　　 2、空间学习记忆能力:与正常组比较，模型组大鼠第五天逃避潜伏期时间显著增加（P＜0.01）;与模型组比较，维生素E组与温和灸组第五天潜伏期时间均缩短，且有统计学意义(P＜0.05），维生素E组与温和灸组差异无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠70S内穿越平台的次数无统计学差异(P＞0.05）。各组大鼠第四象限活动时间，与正常组比较，模型组大鼠在第四象限活动时间减少(P＜0.05）;与模型组比较，维生素E组及温和灸组大鼠在第四象限的活动时间均有所增加(P＜0.05），且达到正常水平（与正常组比较P＞0.05），维生素E组与温和灸组无统计学差异（P＞0.05）。<br>　　 3、各组大鼠外周血细胞凋亡检测:与正常组比较，模型组大鼠外周血细胞凋亡比例升高，且有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较，维生素E组大鼠外周血细胞的凋亡比例下降(P＜0.01)，温和灸组大鼠外周血细胞的凋亡比例虽有所降低，但没有统计学意义P＞0.05）。维生素E组与温和灸组大鼠外周血细胞凋亡比例差异有统计学意义(P＜0.01)。<br>　　 4、多组织器官P16蛋白表达:与正常组比较，模型组大鼠海马、肝脏、肾脏组织中P16蛋白的表达水平均显著升高(P＜0.01）;与模型组相比，温和灸组海马、肝脏组织中P16蛋白的表达水平显著降低(P＜0.01），肾脏组织中P16蛋白的表达水平降低(P＜0.05)。肾脏组织中维生素E组与温和灸组p16蛋白表达水平有差异(P＜0.01）。<br>　　 5、多组织器官PCNA蛋白表达:与正常组比较，模型组大鼠海马、肝脏、肾脏组织中PCNA蛋白的表达水平显著下降(P＜0.01);与模型组相比，温和灸组海马组织中PCNA蛋白的表达水平显著升高（P＜0.01），肝脏、肾脏组织中PCNA蛋白的表达水平升高(P＜0.05)。肾脏组织中维生素E组与温和灸组PCNA蛋白表达水平有差异(P＜0.01)。<br>　　 6、相关性分析结果表明，大鼠海马、肝脏、肾脏组织中P16与PCNA蛋白含量表达均呈负相关性(P＜0.01或P＜0.05)。<br>　　 结论:<br>　　 1、温和灸肾俞穴对D-半乳糖衰老大鼠的一般状态有所改善;<br>　　 2、温和灸肾俞穴对D-半乳糖衰老大鼠空间学习记忆能力有一定的改善作用;<br>　　 3、温和灸肾俞穴可能通过降低D-半乳糖衰老大鼠海马、肝脏、肾脏中表达升高的P16蛋白表达水平，以达到延缓衰老的作用;<br>　　 4、温和灸肾俞穴可能通过升高D-半乳糖衰老大鼠海马、肝脏、肾脏组织中表达降低的PCNA蛋白表达水平，增强组织细胞的增殖活性，从而起到延缓衰老的作用;<br>　　 5、在D-半乳糖衰老大鼠组织中P16蛋白的表达与PCNA蛋白的表达呈负相关性。