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摘要背景:Oddi括约肌(Sphincter of Oddi，SO)末端开口于十二指肠大乳头，是独立于十二指肠壁肌层的括约肌。它是胆汁排出胆道的唯一门户，调节着胆胰液分泌，维持着胆管内的低压、低流量系统内环境稳定[1-2]，被喻为胰液和胆汁流动的“闸门”，是胆胰结合部区域最重要的解剖结构和功能区域。Oddi括约肌收缩功能异常统称为Oddi括约肌功能障碍(sphincter of Oddi dysfunction，SOD)，是指SO收缩功能异常，最常见是括约肌张力过高。SOD属于胆胰液通过胆胰结合部的良性非结石性梗阻，包括SO运动功能障碍和结构改变，病变可单独累及胆管括约肌或胰管括约肌，也可同时累及两者。目前针对SOD的治疗主要有内镜治疗、外科手术以及药物治疗。但目前为止还没有发现一种可以特异性作用于SO的有效治疗药物。因此，积极寻求有效治疗SOD的中西药物，改善和维护SO的舒张功能已经迫在眉睫。<br>　　 魏经国教授[3]证实高胆固醇血症(Hypercholesterolemia)确可以引发SOD，但具体机制至今尚未明了。目前的研究证明SOD的发生主要与SO细胞内钙离子（calciumion）的超载有关。钙离子是存在于细胞内的第二信使，胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化与平滑肌收缩功能密切相关。在平滑肌细胞膜上普遍存在着离子通道，这些蛋白直接参与形成和调节细胞内钙离子的浓度变化，其中钾离子通道起着非常重要的作用。电压门控型钾通道(voltage-dependent potassium channel，Kv)和大电导钙激活钾通道BKca(large conductance Ca2+-sensitive K+channels，BKca)由于在平滑肌细胞膜上数量多，分布广，对膜电位影响大[4-6]，成为许多药物治疗平滑肌尤其是心肌舒缩功能异常的有效作用靶点。<br>　　 芍药甘草汤(shaoyaogancao decoction，SGD)出自张仲景的《伤寒论》，由白芍药、炙甘草等组成，是常用的缓急止痛之方，实验研究有镇静、止痛、松弛平滑肌等作用。已有文献报道其对正常兔离体肠管运动[7]和预收缩的大鼠子宫均具备舒张作用，我们应用中药白芍提取物芍药苷作用兔离体SO肌环，亦发现芍药苷对Ach预收缩的SO肌环具有明显的舒张作用[8]。但芍药甘草汤舒张SO的具体机制至今未见相关报道。为进一步研究芍药甘草汤作用机制，本实验拟采用RT-PCR和WesternBlotting方法观察经不同剂量组芍药甘草汤治疗后的高胆固醇血症兔SO细胞Kv4.3通道和BKca通道基因和蛋白表达的变化，探讨其作用机制，为临床应用芍药甘草汤治疗SOD提供一定的依据。<br>　　 目的:<br>　　 1.观察高胆固醇血症对兔SO细胞Kv4.3通道、BKca通道α亚基、BKca通道β1亚基mRNA和蛋白表达的影响;<br>　　 2.研究不同剂量组的芍药甘草汤对高胆固醇血症兔SO细胞Kv4.3通道、BKca通道α亚基、BKca通道β1亚基mRNA和蛋白表达的影响。<br>　　 方法:<br>　　 1.健康纯种新西兰大白兔随机分为5组，即对照组(CONTROL，CON)、高胆固醇血症组(Hypercholesterolemia，HC)和芍药甘草汤大剂量组（high-dose）、中剂量组(mid-dose)和小剂量组(low-dose)。对照组饲以标准兔饲料，高胆固醇血症组和芍药甘草汤大、中、小剂量组饲以标准饲料+胆固醇，饲养12周，诱发高胆固醇血症后，芍药甘草汤大、中、小剂量组进行芍药甘草汤灌胃、对照组和高胆固醇血症组使用等量生理盐水灌胃，并继续之前饲养计划，共施行4周。<br>　　 2.取各组兔SO组织，分别进行RT-PCR步骤和Western Blotting，使用凝胶成像系统照相并分析各组Kv4.3通道、BKca通道α亚基、BKca通道β1亚基mRNA和蛋白表达量的变化。使用目的条带和GAPDH条带灰度值比值表示目的通道mRNA的相对表达量，使用目的通道条带灰度值与β-actin条带光密度值的比值表示相应目的通道蛋白的相对表达量。<br>　　 结果:<br>　　 1.高胆固醇血症明显降低Kv4.3通道mRNA和蛋白表达水平，但并不影响BKca通道α亚基、BKca通道β1亚基mRNA和蛋白表达量。<br>　　 2.芍药甘草汤可以明显上调高胆固醇血症兔Kv4.3通道、BKca通道α亚基、BKca通道β1亚基mRNA和蛋白表达水平，而此作用与芍药甘草汤剂量有一定的依赖性，大剂量芍药甘草汤作用最强，小剂量芍药甘草汤作用较弱，并且小剂量的芍药甘草汤对Kv4.3通道mRNA和蛋白表达的上调并无明显作用。<br>　　 结论:<br>　　 1.SO细胞Kv4.3通道蛋白表达量的变化应该是HC兔钾离子通道活性下调的原因之一，芍药甘草汤可以通过上调Kv4.3通道蛋白表达量起到舒张SO的作用。<br>　　 2.高胆固醇血症并不显著引起BKca通道α亚基、BKca通道β1亚基表达量的变化，但芍药甘草汤确实可以通过上调BKca通道表达量起到对SOD的治疗作用。<br>　　 3.芍药甘草汤对高胆固醇血症兔Kv4.3通道、BKca通道α亚基、BKca通道β1亚基mRNA和蛋白表达水平上调作用具有剂量依赖性，大剂量芍药甘草汤作用较强。