检索历史 清除

摘要目的:哺乳动物中唯一的O-葡萄糖基转移酶hCLP46(Poglutl)是Notch信号通路中的调控因子。hCLP46在急性髓性白血病和T-淋巴急性白血病病人中和白血病细胞系中高表达,但是过表达hCLP46所引起的细胞生物学效应还不清楚。随后在基因敲除小鼠模型中的研究表明,敲除hCLP46的小鼠在胚胎9.5天死亡,表现出比Notch受损更严重的表型,提示hCLP46有除Notch之外的其他调控靶点。<br>　　 方法:构建四环素(Tet)诱导的293TRex-hCLP46细胞株,采用免疫印迹、RealTimePCR、免疫荧光和流式细胞术等检测手段,在过表达外源hCLP46和RNA干扰技术敲低hCLP46的表达时,检测Notch信号通路、细胞的增殖和凋亡及调控细胞增殖的细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21和p27、TGFβ1信号通路中Smad3和pSmad3所受到的影响。<br>　　 结果:过表达hCLP46激活配体依赖的Notch1信号,敲低hCLP46导致Notch信号通路效应因子Hes1表达降低。过表达hCLP46抑制细胞增殖,伴随着细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂(CDKIs)p21和p27的mRNA水平和蛋白水平增加;敲低hCLP46促进细胞增殖,伴随着p21和p27的mRNA水平和蛋白水平降低。同时,过表达和敲低hCLP46对细胞凋亡没有显著影响。过表达hCLP46提高Smad3和pSmad3的蛋白水平,但对磷酸化酶PPM1A的表达没有影响。利用DAPT抑制Notch信号后,hCLP46依然可以提高Smad3和pSmad3的蛋白水平。<br>　　 结论:hCLP46激活配体依赖的Notch信号,并通过调控CDKI的表达调控293TRex细胞增殖;hCLP46以不依赖于Notch信号通路的方式增强TGFβ1/Smad3信号。这有可能是影响白血病发生的候选通路,并为白血病的治疗提供了新的基因靶点。