检索历史 清除

摘要目的:糖尿病会对中枢神经系统产生损害，形成糖尿病脑病(diabetic encephalopathy)，临床上表现为认知功能障碍。研究显示海马突触可塑性的变化与糖尿病认知功能障碍有关。钙/钙调素依赖性蛋白激酶-Ⅱ（calcium/calmodulin-de pendprotein kinase-Ⅱ，CaMKⅡ）是调节学习记忆与突触可塑性的重要蛋白因子。CaMKⅡ的含量间接反映了学习记忆的能力。本实验旨在探讨丁苯酞对链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)糖尿病大鼠认知功能障碍以及CaMKⅡ的影响。<br>　　 方法:<br>　　 1、制备STZ糖尿病大鼠模型及分组:<br>　　 健康雄性(Sprague-Dawley，SD)大鼠55只（体重140-160g），随机分为正常对照组(NC组，n=10只)，糖尿病组（n=45只），糖尿病组大鼠空腹过夜后一次性腹腔注射STZ60mg/kg，72h后于尾静脉测随机血糖，血糖≥16.7mmol/l视为造模成功。成模后将糖尿病组大鼠随机分为糖尿病对照组(DC，n=15)，糖尿病丁苯酞低剂量组（DL组，n=15），糖尿病丁苯酞高剂量组(DH组，n=15)。<br>　　 2、干预:<br>　　 动物成模后，给予NC组等量玉米胚芽油灌胃，给予DC组等量玉米胚芽油灌胃，给予DL组丁苯酞(60mg/kg)+等量玉米胚芽油灌胃给予，DH组丁苯酞(120mg/kg)+等量玉米胚芽油灌胃，每日1次，历时12周。<br>　　 3、一般情况观察:<br>　　 观察并记录大鼠精神状态及进食、饮食、尿量等一般情况，检测并记录血糖、体重变化。<br>　　 4、行为学检测:<br>　　 各组大鼠于成模12周后分别进行Morris水迷宫实验，包括前5天的定位航行实验以记录逃避潜伏期及第6天的空间探索实验以记录60s内穿越平台次数。<br>　　 5、制备标本及观察指标:<br>　　 水迷宫实验结束次日，处死大鼠，取海马组织，行HE染色观察海马组织形态，行实时荧光定量-聚合酶链反应(R-TPCR)检测CaMKⅡmRNA水平以及免疫组织化学分析、蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测细胞CaMKⅡ蛋白表达。<br>　　 6、统计学分析:<br>　　 所得数据均应用SPSS13.0统计软件包理，应用两个独立样本的t检验、完全随机设计的单因素方差分析、重复测量方差分析、秩和检验进行统计，应用均数±标准差表示结果，应用P＜0.05表示差异有统计学意义。<br>　　 结果:<br>　　 1、一般情况观察<br>　　 正常对照组大鼠血糖正常、皮毛光亮、体重稳定增长、反应灵敏等。糖尿病大鼠血糖明显升高（＞20.0mmol/l），具备糖尿病的典型症状如多尿、多饮、多食等，逐渐出现皮毛枯黄、生长缓慢、体重下降、反应迟钝等现象。干预过程中，丁苯酞高剂量组大鼠一般情况比丁苯酞低剂量组好。<br>　　 2、Morris水迷宫结果<br>　　 基础游泳速度:各组大鼠游泳速度无统计学意义。<br>　　 位航行实验:与正常对照组相比，糖尿病对照组逃避潜伏期延长(P＜0.05)，提示成模后12周，糖尿病大鼠出现认知功能障碍;与糖尿病对照组相比，丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组逃避潜伏期缩短(P＜0.05);与丁苯酞低剂量组相比，丁苯酞高剂量组逃避潜伏期在第1天和第2天无显著差异，第3天到第5天逃避潜伏期缩短(P＜0.05)，不同天数的潜伏期长短差异有统计学意义(P＜0.05)，第1天＞第2天＞第3天＞第4天＞第5天，天数和分组之间不存在交互作用。<br>　　 空间探索实验:与正常对照组相比，糖尿病对照组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组大鼠穿越平台次数减少(P＜0.05);与糖尿病对照组相比，丁苯酞低剂量组、丁苯酞高剂量组大鼠穿越平台的次数增加(P＜0.05);与丁苯酞低剂量组相比，丁苯酞高剂量组大鼠穿越平台次数增加(P＜0.05)。<br>　　 3、海马组织HE染色结果<br>　　 正常对照组海马CA1区神经细胞形态正常，结构完整，排列整齐;糖尿病组细胞排列紊乱，胞体缩小，胞质红色，正常形态神经细胞数量明显减少。丁苯酞低剂量组和丁苯酞高剂量组细胞形态正常，排列较整齐，结构较为完整。<br>　　 4、免疫组化结果<br>　　 糖尿病对照组海马CaMKⅡ蛋白表达量较正常对照组降低(P＜0.01);丁苯酞低剂量组和丁苯酞高剂量组的CaMKⅡ表达量均比糖尿病对照组增高(P＜0.01);丁苯酞高剂量组的CaMKⅡ表达量高于丁苯酞低剂量组(P＜0.01)。<br>　　 5、Rt-PCR结果<br>　　 糖尿病对照组海马CaMKⅡ表达量较正常对照组降低(P＜0.05);丁苯酞低剂量组和丁苯酞高剂量组的CaMKⅡ表达量均比糖尿病对照组增高(P＜0.01，P＜0.05);丁苯酞高剂量组的CaMKⅡ表达量高于丁苯酞低剂量组(P＜0.01)。<br>　　 6、Western blot结果<br>　　 糖尿病对照组的CaMKⅡ蛋白表达量低于正常对照组(P＜0.01);丁苯酞低剂量组和丁苯酞高剂量组的CaMKⅡ蛋白表达量与糖尿病对照组相比均增高(P＜0.01);丁苯酞高剂量组的CaMKⅡ蛋白表达量高于丁苯酞低剂量组(P＜0.01)。<br>　　 结论:<br>　　 1、STZ糖尿病大鼠成模12周时学习记忆能力明显下降，大鼠海马CaMKⅡ表达下调。<br>　　 2、丁苯酞能上调STZ糖尿病大鼠海马CaMKⅡ表达，提高其学习记忆能力，预防糖尿病认知障碍的发生，并且高剂量优于低剂量。