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摘要MicroRNA(miRNA)在人体发育、肿瘤发生、细胞增殖和凋亡过程中发挥重要作用。MiR-23a～27a～24基因簇(miR-23a～27a～24cluster，miR-cluster)定位于染色体19p13，其编码的pri-miRNA转录本经剪切后形成miR-23a、miR-27a及miR-24三种miRNA。<br>　　课题组前期研究证实miR-24通过抑制红系特异蛋白—带3蛋白的表达阻碍红白血病细胞系K562分化。本研究在此基础上进一步探讨miR-cluster在红系分化障碍过程中的作用。我们克隆了区间范围为nt-2425～nt-94的一段序列（以pre-miR-24-2第一个碱基为+1），该序列包含了文献报道的miR-23a～27a～24的启动子核心区域;生物信息学发现转录因子NF-κBp65(p65)在该序列的nt-243～nt-235区域有作用位点，相关分子实验证明p65直接与该序列结合，上调该序列的荧光素酶报告基因活性，并促进三种miRNA的表达，而三种miRNA可以抑制p65的表达，从而建立p65/miR-23a～27a～24的负反馈调节关系。我们还发现，在定向红细胞分化培养基中培养C57BL/6小鼠骨髓来源细胞（培养第9、10天出现成熟红细胞）3天，p65及磷酸化p65(p-p65)急剧升高，而后快速下降，这一过程与miR-cluster呈现负相关的动态变化，提示了p65/miR-23a～27a～24负反馈调节参与红细胞成熟的过程。培养红白血病细胞系K562于pH7.6或含有促红细胞生成素（Erythropoietin，EPO）的培养基中诱导K562细胞分化，检测分化后p65、p-p65和三种miRNA的表达变化，发现分化后细胞中p65和三种miRNA水平均显著下降，提示K562细胞可能被阻滞在相当于体外培养的第5天阶段，高水平的p65和p-p65是其分化障碍的原因;干扰p65表达时，K562细胞分化;p65抑制剂(Parthenolide，PN)或三种miRNA抑制剂(inhibitors)均能够显著促进K562细胞分化。在体动物实验研究发现，PN能够显著延长红白血病小鼠的存活时间，抑制转移。<br>　　此外，生物信息学分析发现26种红系分化相关蛋白是三种miRNA的作用靶点。以带3蛋白，带4.1蛋白R，血型糖蛋白A与p16作为研究对象，证明三种miRNA能够明显下调四种蛋白的表达。提示p65在红系分化中的作用是通过三种miRNA调控红系相关蛋白来实现。<br>　　综上所述，我们的研究证明了p65/miR-23a～27a～24负反馈调节是红细胞成熟的关键分子事件，解释了K562细胞分化障碍的原因，为红白血病的生物治疗提供了新靶点。