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光学显微成像及在生物样品显示与测量中的应用

摘要生命科学研究的突破在很大程度上依赖于各种先进的分析测试系统,显微成像系统是其中最常见和最重要的分析测试系统之一。传统的显微镜已经远不能满足目前生命科学的要求,发展新的显微成像分析技术,对细胞等微小生物样品实现无创伤、定量、动态的显微分析是目前生命科学研究的迫切需求。本文分别基于干涉和无透镜全息原理,发展了两种新型光学显微技术,来实现对生物样品的成像与测量,取得的主要研究成果有:<br>   在广泛调研生物显微技术的基础上,设计并研制了一套离轴干涉显微成像系统,以血红细胞为样品,实现了其光相位场的定量成像。干涉图的处理选择以傅里叶变换为基础的相位提取技术和基于离散余弦变换的无加权最小二乘法的相位解包技术,得到的光相位场分布结果与文献报道吻合。<br>   利用上述研制的干涉显微系统,首次通过相位成像分析了金属离子对细胞的影响,给出了细胞受影响后的定量相位分布,计算出相位面积和相位体积等参数,实现了对血红细胞状态的实时、定量的全程分析,并由此判定金属离子对细胞的破坏趋势和程度。所得的定量分析结果与微分干涉差(DIC)显微镜的定性观测一致。<br>   为了得到被测生物样品更多的细节信息,进一步研究了微离轴干涉模式,提出了将希尔伯特变换相位提取算法引入到微离轴单幅干涉图的处理中,有效改善了波前恢复的高频分量,使细胞轮廓更加清晰。通过直径、面积、圆度和相位分布直方图等参数评价基于微离轴干涉模式的希尔伯特定量相位成像系统的性能,结果表明该系统在灵敏度和边缘轮廓提取等方面具有较强的优势,兼备快速采样和多细节成像能力。<br>   为了突破现有显微成像技术视场的瓶颈,研究了无透镜全息显微成像术,其视场大小和记录用数字传感器的有效感光面积一样。为保证大视场前提下的高分辨率,引入了亚像元高分辨率成像术,实现了单幅图视场达18cm2的1.5G(等效)像素成像,半节距分辨率达2.19μm。<br>   大视场成像为跟踪动态生物样品的运动轨迹提供了便利,据此发展了双光源无透镜全息显微成像系统,同时追踪了成千上万的精子的三维运动轨迹,揭示了部分精子游动服从螺旋型运动规律,并且右手型螺旋运动数目占总螺旋型数目的90%以上,给出了精子运动线速度、角速度等运动参数。在此基础上,研制了便携式双光源无透镜全息显微成像系统,具有体积小,质量轻等特点,在远程医疗中具有潜在应用价值。

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