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摘要眼柄神经节的X器官-窦腺复合体(X-organ-sinus gland，XO-SG)是甲壳动物神经内分泌调控中心，主要分泌四种激素:蜕皮抑制激素(Molt-inhibiting hormone，MIH)、甲壳动物高血糖激素(Crustacean hyperglycemic hormone，CHH)、性腺抑制激素(Gonad-inhibiting hormone，GIH)、大颚器官抑制激素(Mandubular organinhibiting hormone，MOIH)。由于这一组神经肽的一级结构与CHH许多相同之处，它们就被统称作CHH家族神经激素(Crustacean hyperglycemic hormone，CHH)。MIH属于CHH家族Ⅱ型神经肽，对甲壳动物蜕皮有着明显的抑制作用。CHH属于CHH家族Ⅰ型神经肽，主要调控着甲壳动物体内的血糖水平，维持着各个组织与器官的能量供应，参与渗透压调节等作用。拟穴青蟹(Scylla paramamosain)是我国重要的海水养殖蟹类。本文采用分子生物学等方法对拟穴青蟹MIH和CHH基因开展了克隆与表达的研究。主要结果如下:<br>　　 1)拟穴青蟹蜕皮抑制激素基因(Sp-MIH)的cDNA全长1226 bp，开放阅读框为342 bp，编码一个由113个氨基酸组成的多肽，其中包括35个氨基酸组成的信号肽和78个氨基酸组成的成熟肽。Sp-MIH基因由2个内含子和3个外显子组成。同源性分析表明Sp-MIH在结构上较为保守，与其他甲壳动物同源性很高。系统发育分析结果也表明Sp-MIH能与甲壳动物短尾类聚为一束。实时定量PCR结果显示，Sp-MIH分布于眼柄神经节和脑中，且在眼柄神经节中高表达，在非神经组织器官中几乎不表达。检测不同蜕皮期的眼柄神经节，发现Sp-MIH mRNA的表达水平自蜕皮后期至蜕皮间期显著增加，然后迅速降低，至蜕皮晚前期达到最低，表达量仅为蜕皮后期的一半，该变化与MIH抑制蜕皮的生理功能相符。在不同卵巢发育期的神经组织器官（眼柄神经节、脑）中，Sp-MIH水平在卵黄发生前期持续升高，待卵黄发生后表达水平有所下降，但仍保持一定量来调控卵巢发育，表明MIH可能参与初级卵黄发生的调控。<br>　　 2)拟穴青蟹甲壳动物高血糖激素基因克隆获得两种异构体(Sp-CHH1和Sp-CHH2)。Sp-CHH1的cDNA全长1722 bp，开放阅读框为426 bp，编码141个氨基酸，其中包括27个氨基酸组成的信号肽，37个氨基酸组成的CHH前体相关肽(CPRP)，KR位点和75的氨基酸组成的成熟肽。Sp-CHH2的cDNA全长1841 bp，开放阅读框420 bp编码139个氨基酸，其中包括27个氨基酸组成的信号肽，37个氨基酸组成的CHH前体相关肽(CPRP)，KR位点和73的氨基酸组成的成熟肽。Sp-CHH1和Sp-CHH2有相同的信号肽和CPRP，不同之处在于成熟肽。两个异构体成熟肽前40个氨基酸是一致的，在成熟肽第41个氨基酸处出现明显差异。CHH基因克隆得到1个内含子和2个外显子，并发现一个微卫星位点。同源性分析表明Sp-CHH在结构上较为保守，与其他甲壳动物同源性很高。系统发育分析结果表明Sp-CHH能与甲壳动物短尾类聚为一束。采用实时定量PCR方法分析，结果显示Sp-CHH在眼柄神经节、脑、胸神经团、胃、肝胰腺、心脏、肌肉7个组织中表达，在眼柄神经节内表达最高。检测眼柄神经节，发现Sp-CHH在不同蜕皮期的表达趋势与Sp-MIH相似，提示CHH也可能具有抑制Y器官分泌蜕皮激素的功能。对卵巢发育不同期眼柄神经节进行检测，发现Sp-CHH在成熟之前表达量持续增长，提示卵巢发育需要高表达量CHH的参与。眼柄神经节Sp-CHH原位杂交表明，Sp-CHH主要分布在X器官中，杂交信号强，且主要分布于神经分泌细胞的细胞质内，这与其他甲壳动物免疫组化的研究结果一致。<br>　　 综上所述，本研究从分子水平上对Sp-MIH和Sp-CHH的结构及功能进行探讨，该研究可以丰富和充实青蟹内分泌生理的理论基础，还可为青蟹养殖技术的创新提供理论支撑，具有较重要的理论意义和潜在的应用价值。<br>